Поліомієліт: вірусологічна діагностика і лікування






    Головна сторінка





Скачати 18.28 Kb.
Дата конвертації30.05.2018
Розмір18.28 Kb.
Типреферат

реферат

на тему:

«Поліомієліт: вірусологічна діагностика і лікування»

вірусологічна діагностика

Методи вірусологічної (в тому числі і серологічної) діагностики поліомієліту застосовуються в залежності від завдань, які виникають в кожному окремому випадку. При наявності ясною клінічної характеристики в типових паралітичний випадках хвороби слід визначити імунологічний тип і генетичні ознаки вірусного штаму, який викликав дане захворювання. Але, звичайно, в цих випадках клініцист не дуже зацікавлена ​​в вирусологическом підтвердження діагнозу і зазвичай задовольняється результатами обстеження на антитіла в парних пробах крові. Слід вказати на можливість помилкового клінічного діагнозу поліомієліту навіть в паралітичний випадках, т. К. Описані подібні з поліомієлітом захворювання, викликані вірусами з групи Коксакі і ЕСНО (М.П. Чумаков, М.К. Ворошилова і ін., 1959). Тому необхідно вірусологічне підтвердження навіть в ясних для клініциста випадках.

У Непаралітична і абортивних випадках поліомієліту, коли клінічна та клініко-лабораторна діагностика недостатньо обґрунтована, виділення з патологічних субстратів і визначення типу вірусу в поєднанні з результатами серологічного обстеження може підтвердити або відкинути передбачуваний діагноз поліомієліту, що має практичне значення (наприклад, для організації протиепідемічних заходів ).

Багато агенти можуть викликати синдром асептичного менінгіту, який не можна без лабораторного дослідження відрізнити від непаралітичної форми поліомієліт. Серозний менінгіт, не відрізняється від непаралітичної форми поліомієліту, можуть викликати такі віруси: збудники свинки (паротиту), лпмфоцітарного хоріоменінгіту, ряд вірусів з груп ЕСНО і Коксакі, герпес простий, герпес зостер, вірусний енцефаліт, крім того, лептоспіри і ін. Найчастіше доводиться проводити одночасне обстеження матеріалу на присутність вірусу поліомієліту та інших ентеровірусів (Коксакі, ЕСНО, РЕО-груп). І, нарешті, вірусологічні, серологічні методи дослідження набувають особливого значення для контролю якості профілактичних щеплень пероральної поліомієлітної живою вакциною, напр. для визначення частоти хорошою прівіваемості живої вакцини за результатами виділення вакцинних штамів з кишкового вмісту або з глоточного виділень у щеплених і контактують з ними осіб, а також по динаміці наростання рівнів антитіл в крові у вакцинованих людей. Періодично можуть знадобитися вибіркові обстеження здорового населення на розподіл рівнів антитіл до різних типів поліовірусів, а також на частоту спонтанного носійства штамів вірусу поліомієліту та інших ентеровірусів.

Матеріал для обстеження. Поліовірус можна виділити зараженням мавпи або сприйнятливих тканинних культур, в окремих випадках також бавовняних пацюків і новонароджених білих мишей (для штамів II і IV типів). Віруси ЕСНО і декількох типів Коксакі можуть бути виділені зараженням культур, а більшість вірусів Коксакі групи А тільки зараженням новонароджених білих мишей. Фекалії хворого або здорового людини в осередку інфекції представляють найбільш багатий і регулярне джерело для ізоляції поліовірусу та інших ентеровірусів. Поліовірус в фекаліях може виявлятися протягом 2-3 тижнів, іноді 12 тижнів і більше після початку хвороби або прихованої інфекції; максимальну кількість поліовірусу в фекаліях - до 10 інфекційних доз в 1 г.Виделеніе ентеровірусів можливо також із стічних вод каналізації, з мух та інших об'єктів зовнішнього середовища, які можуть бути забруднені фекаліями. Поліовірус можна виділити також з носоглоткових змивів і тампонів із зіву незабаром після початку захворювання або при прихованої інфекції (приблизно протягом першого тижня).

Дослідження крові на присутність вірусу поліомієліту (наприклад, вакцинного штаму) надзвичайно трудомістке, складне і можливо тільки при вирішенні експериментальних завдань в особливих умовах. Дослідження спинномозкової рідини при поліомієліті недоцільно.

У секційних випадках слід отримати асептично проби з спинного (шийного та поперекового відділів) і довгастого мозку по 2 см 3 (спосіб збереження при 1 ° 4 ° в 50% розчині нейтрального гліцерину або в замороженому стані без гліцерину); крім того, слід в цих випадках обстежити на вірус вміст кишечника (5-15 г) пли відмиту тканину кишкової стінки на різних рівнях. Всі проби повинні пересилатися в лабораторії і зберігатися на холоду (при 1 ° від - (- 4 0 до + 8 °) або в замороженому вигляді (від -20 ° до -70 °).

Підготовка обстежуваних матеріалів для зараження культур або тварин передбачає обов'язкове видалення бактеріальних контамінантів шляхом обробки проб антибіотиками (сумішшю пеніциліну від 500 до 10 000 ОД в 1 мл, стрептоміцину - 500-2000 [в 1 мли, можливо, інших антибіотиків). Раніше для цих цілей застосовувалася обробка проб ефіром, але вона поступається антибіотиків по ефективності. До обстеження екстракти фекалій з антибіотиками (20 або 10% суспензії) слід звільнити від грубих частинок шляхом центрифугування.

Методика дослідження. При первинному виділенні вірусів із групи Коксакі заражаються в мозок і підшкірно новонароджені білі миші в віці не старше 24 годину. Молоді білі миші і бавовняні пацюки можуть бути заражені матеріалом, що містить поліовірус II типу, в головний мозок або в спинний мозок і в черевну порожнину, або внутрішньом'язово. Для перевивання вірусу від хворих до свіжих тваринам використовується суспензія спинного і головного мозку.

Мавпи макаки (будь-який вид), мавпи і ін. Можуть бути заражені матеріалом, що містить вірус поліомієліту, різними шляхами: в головний або в спинний мозок (по 1,0 або 0,2 млсоответственно), через ніс під легким наркозом (можна 3 5 днів поспіль), в черевну порожнину і внутрішньом'язово. В пасажах на мавпах використовується тканина спинного і довгастого мозку хворих тварин.

Найбільш споживані в наст, час культуральні пробіркових методи вірусологічної та серологічної діагностики як найдешевші і доступні для обстеження великого числа проб. Завдяки цілій серії досліджень Ендерса, Солка, Янгнера, Мельника, Дульбекко і багатьох інших в 1949-1955 рр. були розроблені ефективні методики виділення, розмноження і ідентифікації ентеровірусів в культурах клітин.

Виділення і розмноження вірусу поліомієліту для лабораторних цілей можливо в первинних культурах нормальних тканин від людини (хірургічні відходи і ембріони) або різних видів мавп. Для цього найчастіше використовувалися фібробласти шкірно-м'язової тканини, клітини нирок, насінники, амніону та ін. Крім того, можуть з успіхом використовуватися вторинні культури або лабораторні лінії безперервно зростаючих клітин ракового походження (часто застосовувалися лабораторні лінії клітин людського раку: Не1а, нер- 2, КВ, НЬ8, Детройт-6 і ін.), а також безперервні лінії клітин, що походять від нормальних тканин (напр., клітини амніону людини і клітини соц з серця мавпи ціномольгус). Крім того, виявилося, що в ряді випадків безперервні лабораторні лінії клітин, що походять від тварин (кроликів, свиней), що не сприйнятливих до поліомієліту, можуть ставати повністю сприйнятливими до зараження поліовірусом в результаті відбувається трансформації (можливо ма-лігнізаціі тканини) в процесі тривалих пасажів безперервно зростаючих клітин.

Культури клітин у відповідній рідкому середовищі для розмноження поліовірусу можуть виготовлятися асептично різними методами (суспензія фрагментів тканини, одношарова клітинна мембрана на склі; фіксування фрагментів в курячої плазмі; покриття агаром клітинного шару на склі і т. П.) В герметично закритих стерильних судинах. Додавання невеликої кількості антибіотиків (100-200 ОД пеніциліну, 50 ЦГ стрептоміцину на 1 млсреди) надійно охороняє більшість асептично приготованих культур клітин від випадкового проростання мі-Кробу-контоменантами з повітря.

Про присутність активного поліовірусу в зростаючої культурі клітин можна судити по наступаючої дегенерації клітин в результаті цитопатогенного дії вірусу. При цьому необхідно порівняння з контрольними незараженими клітинами і подальша перевірка специфічності цитопатогенного ефекту в досвіді нейтралізації типовий імунною сироваткою.

Крім того, цитопатогенну дію поліовірусу в суспензії клітин можна зареєструвати за допомогою спостережень за змінами кольору фенолрот або іншого індикатора рН середовища, а саме клітини у суспензії, яка не містить поліовірусу, поступово протягом декількох днів зрушують рН середовища в кислий бік і колір фенолрот змінюється з червоного в жовтий; в той же час в пробірках з активним вірусом поліомієліту клітини швидко дегенерують, метаболізм припиняється, кислотність середовища не змінюється, і вихідний червоний колір середовища (з індикатором фенолрот близько 0,004%) зберігається до кінця спостереження. На цій основі розроблена методика так зв. кольоровий проби (або рН-тест) для виділення і титрування вірусу поліомієліту, а також для визначення титру антитіл в сироватці. У кольоровій пробі можуть ставитися і досліди нейтралізації з метою визначення імунологічного типу обстежуваного вірусу.

Вірус поліомієліту можна виявляти і по утворенню ізольованих колоній, або бляшок, в культурах одношарових клітин, покритих шаром живильного агару. Бляшкоутворення в агарових культурах зростаючих клітин з індикатором нейтральрот використовується для точного визначення титру поліовірусу в матеріалі або для диференціації виділених штамів по чутливості до зниження концентрації бікарбонатів і катіонів.

Хід дослідження матеріалу в пробіркових культурах тканини на вірус поліомієліту включає наступні методики: попереднє вирощування протягом декількох днів незаражених клітинних культур, внесення в добре розвинені культури досліджуваного матеріалу, попередньо обробленого антибіотиками та ін., Инкубирование заражених культур при 1 ° 37 ° та спостереження за станом клітин культури приблизно протягом 10 днів. Деякі проби фекалій токсичні для культур, що зазвичай виявляється через 24 години, і в цих випадках слід перевити матеріал культури на 5-й день. Специфічна дія вірусу на клітини зазвичай виявляється на 3-5-й день, іноді на 6-8-й день після зараження; при відсутності дегенерації в культурах першого зараження можна спробувати продовжити спостереження за культурами після заміни середовища свіжої живильною рідиною. При виявленні дегенерації клітин заражених культур проводиться перевивку рідини з таких культур на свіжі культури і визначення в серії культур титру виділеного цитопатогенного вірусу, а потім досвід нейтралізації з включенням специфічних імунних сироваток. Виділення і типування вірусу можна проводити одночасно, додаючи в живильне середовище культур різні види типоспецифічних імунних сироваток; при цьому вірус буде придушуватися в культурах з гомотіповоі імунною сироваткою і проявляти свою дію в культурах з гетеротіповимі імунними сироватками або без сироватки.

Така процедура все ж часто не вдається через низку причин. У дуже небагатьох випадках при лабораторному обстеженні високо інфекціозность матеріалу від хворого на поліомієліт можна отримати відповідь про тип збудника через 3-5 днів після початку аналізу. У більшості випадків процедури виділення, титрування і типування займають від 10 до 40 днів; отже, дійсно ранньої, регулярно використовуваної вірусологічної діагностики поліомієліту поки не існує.

Не можуть прискорити етіологічну діагностику хвороби і чисто серологічні методи дослідження, т. К. Для встановлення діагнозу потрібно визначити наростання титрів антитіл, при одночасному дослідженні 2 або 3-4 проб сироватки крові, взятих з інтервалом в 7-14 днів або більше. Проте обстеження парних проб сироваток в реакції нейтралізації поліовірусу в пробіркових культурах з урахуванням цитопатогенного ефекту або в кольоровій пробі (Солк і ін., 1954) є важливою ланкою в методах лабораторної діагностики.

Для постановки раннього серологічного діагнозу явної чи прихованої інфекції найбільш зручно дослідження в реакції преципітації сироваток крові, взятої в перші 2-3 тижні захворювання (М.С. Балаян, 1960). Серологічне підтвердження діагнозу також можливо за допомогою реакції зв'язування комплементу при використанні строго специфічних нативних антигенів [М.Я. Чумакова, 1958, 1959; Леннет, 1955].

Новий розділ у вченні про варіанти вірусу поліомієліту представляють сучасні методи розмежування атенуйованих (вакцинних) від повністю вірулентних для центральної нервової системи штамів вірусу поліомієліту за допомогою так зв. маркерів. Атенуйованих штами, селекціоновані і очищені за допомогою методу ізольованих колоній (бляшок) в клітинних культурах під шаром агару (по Дульбекко і Фогту), різко відрізняються від диких штамів відсутністю паралптогенной активності при внутрішньомозковому зараженні мавп макак. Ця ознака вважається маркером невровірулентності. Крім того, ате-нуірованние штами, на відміну від диких штамів поліовірусу, дуже погано розмножуються в культурах при t ° 40 ° (різниця в титрах вакцинного вірусу при t ° 36 ° та 40 ° може становити від 10 ° до 10 ° інфекційних одиниць, тоді як у дикого вірусу ця різниця зазвичай не перевищує 10 2 - 10 3 інфекційних одиниць) - це так зв. маркер t ° 40 °. Атенуйованих штами гірше, ніж дикі штами, ростуть в культурах під шаром агару при низькому вмісті бікарбонатів (нижче 0,22%) і кислої реакції середовища. Описано і багато інших ознак, за якими можна відрізняти атенуйованих штами від диких штамів, в тому числі по неоднакового зростання на перещеплюваних лініях клітин від мавпи, по титрів в дослідах нейтралізації імунними сироватками, виготовленими для окремих штамів (вакцинних або диких); по різному відношенню до деяких дезинфікуючим агентам (хлору та ін.). Все розмаїття маркованих ознак повністю ще не вивчено.

Лікування гострого поліомієліту має бути комплексним і проводитися з урахуванням стадії і форми хвороби. При кожному підозрі на гострий поліомієліт слід відразу встановити строгий постільний режим. Доведено, що спокій є головним методом профілактики паралічів і що найкращий результат досягається у тих хворих, яким він був забезпечений рано. Повний спокій має найважливіше значення і в паралітичної стадії. Хворий повинен лежати в зручному положенні, його необхідно оберігати від будь-яких активних рухів і утомливих досліджень. У паралітичної стадії правильне положення тіла і паралізованих кінцівок набуває особливо великого значення. Ранній ортопедичний режим попереджає розтягнення м'язів, розвиток деформацій і контрактур. Слід при цьому уникати постійного одноманітного положення і змінювати його приблизно кожні 2 години.

Протягом усього гарячкового періоду слід вимірювати температуру 3-4 рази на добу, стежити за пульсом, диханням, кров'яним тиском. Необхідно стежити за функцією кишечника і сечового міхура, забезпечити догляд за шкірою та слизовими оболонками. Харчування має бути високоякісним і смачним. При вираженості больового синдрому та підвищеної дратівливості показано застосування болезаспокійливих і заспокійливих засобів (броміди, пірамідон, анальгін, аспірин та ін.). З фізіотерапевтичних процедур найкращий болезаспокійливий ефект дають гарячі укутування. З інших теплових процедур (солюкс, парафін, озокерит і ін.) Кращий ефект дає озокерит.

Ефективність серотерапії сумнівна.

Введення гамма-глобуліну навіть в препаралітичній стадії не робить помітного впливу на перебіг хвороби.

Вітамінотерапія. З перших днів хвороби показано лікування вітамінами. Аскорбінову кислоту призначають у великих дозах (по 0,05-0,1 г на 1 кг ваги хворого на добу, розділивши на 4-5 прийомів).

Лікування вітаміном В12 проводиться в паралітичної і відновної стадіях.

Медіатори. У ранній відновлювальної стадії на 3-4-му тижні хвороби починають лікування медіаторами і стимуляторами, яке з перервами проводиться дуже довго. Застосовують прозерин, галантамін (нівалін), дибазол, секурінін і ін. Курс лікування антіхолінестеразнимі препаратами 15-20 днів. Секурінін протипоказаний при порушеннях дихання, нахили до підвищення кров'яного тиску, при виражених болях і наявності контрактур.

Амінокислоти. У відновної і резидуальной стадіях застосовується елютаміновая кислота.

У комплексному лікуванні поліомієліту відоме значення мають фізіотерапевт і ч е с к и ї методи. Вже було зазначено на значення теплових процедур для боротьби з больовим синдромом. Після падіння температури, стабілізації паралічів і поліпшення загального стану, що настає зазвичай після 7-12 днів, призначають процедури, які розраховані на підвищення обмінних процесів, посилення імунних захисних сил організму і зниження інтоксикації (М.М. Анікін). Застосовують водяні ванни (37-38 °) і вологі укутування. При порушенні дихання при бульбарних формах ці процедури протипоказані. УВЧ призначають на область уражених сегментів спинного мозку (10 сеансів з тривалістю кожного 10-12 хвилин). На підставі протизапального і болезаспокійливого впливу діатермії її застосовують при поліомієліті із суворим дотриманням загальних правил. Курс лікування - 10-15 щоденних сеансів.

Основне значення в лікуванні поліомієліту має правильно і довго проводиться лікувальна гімнастика. Застосовуються також активна електрична гімнастика у вигляді ритмічної фарадізація або ритмічною гальванізації уражених м'язів і в останні роки електростимуляція м'язів імпульсним струмом. Кращий результат виходить при поєднанні методів електричної гімнастики з прийомом медіаторних стимуляторів (М.М. Анікін).

У різні терміни відновлювальної стадії, починаючи з 4-6-го місяця від початку хвороби, успішно застосовується також лікування грязями. Є дані про успішність і більш раннього (2-3 місяці) застосування грязелікування. Грязьові аплікації накладаються на уражену рівень хребта і паралізовані кінцівки. Останнім часом використовуються бруду низьких температур (38-42 °). Більш низькі температури бруду показані в більш ранньому періоді хвороби (Л. Петелін). Спеціалізовані для лікування поліомієліту санаторії є в багатьох республіках і областях Радянського Союзу, на ряді курортів (Євпаторія, Одеса, Цхалтубо і ін.). Лікування паралітичного поліомієліту має бути дуже тривалим, з урахуванням можливості поліпшення функції навіть в резидуальной стадії. Ортопедична допомога важлива з перших днів паралітичної стадії, її роль зростає і методи змінюються в відновлювальної та резидуальной стадіях.



Скачати 18.28 Kb.