Лабораторна діагностика носійства пневмококової інфекції






    Головна сторінка





Скачати 50.07 Kb.
Дата конвертації28.08.2018
Розмір50.07 Kb.
Типкурсова робота

зміст

Вступ

1. Літературний огляд

1.1 Характеристика збудника

1.2 Клінічні форми і епідеміологічні особливості пневмококової інфекції

1.3 Проблеми та механізми резистентності пневмококів до антимікробних препаратів

1.4 Бактеріологічний метод

2. Практична частина

висновки

Список літератури

додаток

Вступ

Актуальність проблеми. Пневмококковая інфекція є частою причиною таких небезпечних захворювань як менінгіт, пневмонія, сепсис.

Пневмококк викликає і такі поширені хвороби, як запалення середнього вуха (середній отит) та запалення пазух носа (синусит). Багато людей є носіями пневмокока, навіть не підозрюючи про це. Бактеріальне носійство пневмокока особливо поширене в дитячих садах (до 60%) і початкових класах школи (до 35%). Найбільш небезпечний пневмокок для маленьких дітей через особливості будови цієї бактерії. Вона має міцну полисахаридную оболонку, впоратися з якою можуть тільки імунні клітини дорослої людини, але не дитини. За даними Всесвітньої організації охорони здоров'я, щорічно в світі захворювання, викликані пневмококком, забирають 1,6 мільйона життів, 800 тисяч з них - діти до двох років і 200 тисяч - діти від 2 до 5 років.

Пневмококки є причиною 80% випадків прихованої бактеріємії у дітей 0-5 років життя, яка протікає з високою лихоманкою без видимого вогнища інфекції. [3,5].

У Росії щорічно пневмококовими менінгітами захворює 324 дитини у віці від 0 до 2 років (10 випадків на 100 000 дітей), пневмококової бактеріємією (зараження крові) - 3 243 дитини (100 випадків на 100 000 дітей), пневмококової пневмонією - 38 960 дітей ( 1200 на 100 000), пневмококовими отити - 713 460 дітей (22000 на 100 000). [6,10].

Саме тому проблема носійства пневмококової інфекції так актуальна в наш час.

Мета роботи. Проведення порівняльного аналізу лабораторних методів дослідження носійства пневмококової інфекції.

Поставлена ​​мета досягалася рішенням наступних конкретних завдань:

1) Скласти огляд літератури з проблеми носійства пневмококової інфекції;

2) Провести порівняльний аналіз лабораторних методів дослідження біологічного матеріалу, спрямованих на діагностику носійства пневмококової інфекції;

3) Вивчити поширеність бактерионосительства S.pneumoniae серед населення в місті Ханти-Мансійськ з 2007 по 2014 рр.

1. Літературний огляд

1.1 Характеристика збудника

Streptococcus pnemoniae (пневмокок) вперше описаний Р. Кохом в 1871 році. [2].

Морфологія та біологічні властивості. Пневмококки представляють собою парно розташовані коки овальної, злегка витягнутої ланцетовидной форми, що нагадують полум'я свічки. Вони можуть розташовуватися також короткими ланцюжками, нагадуючи стрептококи. В організмі людини і тварин утворюють капсулу; при вирощуванні на штучних середовищах вона відсутня. Нерухомі, спор не утворюють, грампозитивні.

За типом дихання - факультативні аероби. [5,8,9] На простих поживних середовищах не ростуть або дають мізерний ріст. Вирощують їх на середовищах з додаванням білка: кров'яних, сироваткових, з асцитической рідиною. На кров'яному агарі колонії пневмококів дрібні, що нагадують росинки, прозорі в прохідному світлі, з утисненим центром, оточені зоною неповного гемолізу, зеленуватого відтінку, подібні до колоніями зеленящего стрептокока. На рідких середовищах дають ніжне помутніння, іноді утворюючи осад. Біохімічно досить активні: розкладають глюкозу, лактозу, мальтозу, інулін і інші вуглеводи з утворенням кислоти, які не розріджують желатину, не утворюють індолу. [4,5,11] Розщеплення інуліну є диференційно-діагностичною ознакою, що допомагає відрізнити пневмококи від стрептококів, які інулін розкладають. Важливим відмітною ознакою служить здатність пневмококів розчинятися в жовчі, в той час як стрептококи добре в ній зберігаються. [12]

Токсиноутворення. Пневмококки містять ендотоксин, а також гемотоксини, фібринолізин, лейкоцідін, гіалуронідазу. Вірулентність пневмокока пов'язана з речовиною капсули. У ній знаходиться антифагин, що перешкоджає фагоцітірованія лейкоцитами пневмококів. [15,19]

Стійкість. Пневмококки малостійкі у зовнішньому середовищі. Вони швидко втрачають життєздатність під дією різних дезинфікуючих речовин. При температурі 60 ° С гинуть протягом 10 хв. На штучних поживних середовищах зберігаються не більше 6-- 7 днів. Разом з тим пневмококи досить стійкі до висушування: в висушеної мокроті залишаються життєздатними до 2 міс. Під дією оптохіна в концентрації 1: 1000000 швидко гинуть. [1,5,8]

Антигенна структура. У всіх пневмококів є один загальний видовий протеїновий антиген, що знаходиться в цитоплазмі. У капсулі пневмококів є різні полісахариди, специфічні для кожного типу. В даний час пневмококи ділять по капсульні антигену на 80 типів. Вважають, що найбільше значення в патології людини мають I, II і III типи, але з кожним роком виявляється патогенність нових типів. [17]

Пневмококки відрізняються від інших мікроорганізмів по ряду властивостей (табл.1).

1.2 Клінічні форми і епідеміологічні особливості пневмококової інфекції

Фактором патогенності бактерії пневмокока є капсульний полісахарид, який забезпечує придушення комплімент-залежною бактеріолітіческій активності крові і фагоцитарної активності лейкоцитів. Капсульний полісахарид є основним антигеном, до якого виробляються антитіла при захворюванні пневмококової інфекцією або здоровому носійстві пневмокока [1, 2].

Виходячи з хімічної будови і антигенних властивостей полисахаридной капсули бактерії, виділяють 93 серотипу S. pneumoniae. Генетично серотипи істотно розрізняються і являють собою ізольовані субпопуляції S. pneumoniae. Серотип збудника в багатьох випадках визначає тяжкість захворювання. Результати досліджень серотиповой складу пневмококів в різних країнах свідчать, що на глобальному рівні більше 80% найбільш важких інвазивних захворювань викликаються 20 серотипами, а 13 сіро-типів викликають 70 - 75% захворювань [3,4, 5].

Пневмококк є типовим представником мікрофлори слизової оболонки верхніх дихальних шляхів людини, і передається, як правило, повітряно-крапельним шляхом.

Резервуаром і джерелом збудника пневмококової інфекції є інфікована людина (хворі будь клінічною формою і, в першу чергу, здорові носії). Спектр клінічних форм захворювання дуже широкий, але переважають захворювання верхніх і нижніх дихальних шляхів.

Рівень носійства S. pneumoniae в людській популяції в цілому варіює залежно від епідемічних умов від 10% до 80%, а у дітей - від 20% до 50%, але в умовах скупченості і формування нових дитячих колективів може досягати 80%. Високий рівень носійства пневмококів в дитячих садах (до 70%), інтернатах (до 86%) [3,6].

Діти перших років життя є основними джерелами пневмококової інфекції, заражаючи оточуючих дорослих. Так, при звичайній частоті носійства у дорослих в 5-7%, серед проживаючих з дітьми вона може досягати 30%. [6]

При проведенні багатоцентрового дослідження по пневмококової інфекції в Росії в 2001 - 2002 році було обстежено 4153 дитини віком до 7-ми років в дитячих садах і дитячих будинках в 11 містах європейської частини Росії (Волгоград, Воронеж, Єкатеринбург, Казань, Краснодар, Москва, Нижній Новгород, Санкт Петербург, Смоленськ, Уфа, Челябінськ) і 8 містах азіатській частині країни (Анадир, Владивосток, Іркутськ, Новосибірськ, Тюмень, Хабаровськ, Ханти-Мансійськ, Якутськ). Носійство пневмококів було виявлено в середньому у 49,3% дітей в дитячих садах і до 86,7% в дитячих будинках. В обох випадках переважали пневмококи 23, 19 і 6 серогрупп: в азіатській частині в пропорціях - 38,2% (23 серогрупи), 23,6% (19 серогрупи) і 25,5% (6 серогрупи), в європейській - відповідно 22 , 2%, 24,1% і 14,8% [7].

За даними НЦДЗ РАМН, в 2010р. серед циркулюючих у носіїв серотипів пневмокока домінували серотипи 6А / В (25%), 19F (21%). 23F (12%) і 15В / С (7%) [8].

Пневмококки 23, 19 і 6 серогрупп (серотипи 23F, 19F, 19A, 6B) часто характеризуються підвищеною стійкістю до пеніциліну і інших антибактеріальних препаратів, а також можуть мати полірезистентними властивостями, що обумовлено генетичними мутаціями циркулюючих штамів.

Спектр антибіотикорезистентності пневмокока залежить як від географічного місця ізоляції, так і від виду матеріалу, з якого ізольований штам (мазок з носоглотки, спинномозкова рідина та ін.). У Росії рівень стійкості пневмококів виділених їх нестерильних локусів допеніцилінів (МПК> 0,06 мг / л) становить в середньому 11%, до макролідів 7%, до тетрацикліну - 25%, котрімоксазолу - 39%. Полірезистентністю (стійкістю до 3 і більше класів антимікробних препаратів) володіє 14,5% штамів пневмокока, більшість з яких (> 90%) виділено з респіраторних зразків. Це ускладнює лікування пацієнтів з пневмококової інфекцією, вимагає застосування дорогих альтернативних антимікробних засобів, збільшує тривалість госпіталізації та медичні витрати на лікування [7,9,15].

Факторами, що сприяють поширенню антибіотикорезистентних штамів є скупченість, відвідування дитячих закладів, відзначено зв'язок між числом дітей в групі і частотою виділення таких штамів [16]. Розрізняють "інвазивні" форми пневмококової інфекції, при яких збудник виявляється в рідинах і тканинах організму, стерильних в нормальних умовах (кров, спинномозкова рідина, перитонеальна і плевральна рідини і т.п.), і "неінвазивні" форми, до яких відноситься "небактеріеміческая "пневмонія (при відсутності збудника в крові), гострий середній отит, синусит і т.п.

До "інвазивних" формам пневмококової інфекції відносяться менінгіт, пневмонія з бактериемий, септицемія, септичний артрит, остеомієліт, перикардит, ендокардит [2,3,10,17], які є найбільш важкими і найбільш дослідженими формами пневмококової інфекції (ІПІ) [2, 3,6,10,17]. Виявлення та діагностика інших форм пневмококової інфекції вкрай ускладнені.

Серед інвазивних форм пневмококової інфекції близько 20% випадків складає пневмококової менінгіт. За попередніх оцінках Всесвітньої організації охорони здоров'я (ВООЗ) на один випадок пневмококової менінгіту припадає 24 випадки пневмококової бактеріємії, 132 пневмококової пневмонії і 3750 випадків гострого середнього отиту [17,18].

У дітей найбільш частими клінічними формами пневмококової інфекції є гострий середній отит (до 60%), синусити (до 45%) і пневмонія (до 65-80% випадків). Пневмококові менінгіти становлять 5-26% усіх гнійних бактеріальних менінгітів у дітей [11,12,13].

Найбільш часто, інвазивними формами пневмококової інфекції хворіють діти у віці від 1 місяця до 2 років. У дітей першого місяця життя присутні материнські антитіла проти пневмокока, а у дітей старше 2 років встигає розвинутися набутий імунітет [5,10,14].

Діти перших 2 років життя не в змозі виробляти антитіла на полісахаридні антигени, що робить їх практично беззахисними перед збудником.Це особливо відноситься до пневмококів серогрупп 6 і ​​19, що володіє найменшою імуногенність і домінуючим серед носіїв і хворих. Групами ризику по захворюваності пневмококової інфекцією є:

· Особи 65 років і старше (в першу чергу - постійно знаходяться в спеціальних установах по догляду за людьми похилого віку). Щеплення проти пневмококової інфекції в цьому віці є обов'язковими в багатьох країнах світу, економічно розвинених країнах і.

· Діти і дорослі з хронічними захворюваннями серцево-судинної, дихальної систем, цукровий діабет, цироз печінки, хронічною нирковою недостатністю, хворобою Ходжкіна;

· Діти і дорослі, які планують або вже зазнали видалення селезінки;

· Діти і дорослі з серповидно-клітинною анемією;

· Діти і дорослі з онкогематологічними захворюваннями;

· ВІЛ-інфіковані діти та дорослі;

· «Організовані» контингенти (військовослужбовці, жителі будинків інвалідів, укладені і інші дорослі і діти, які перебувають в умовах скупченості);

· Мають алкогольну залежність;

· Курці сигарет. [25]

Показання до обстеження: Пацієнти при підозрі на крупозную пневмонію, гострий бронхіт; отит, синусит; менінгіт, менінгоенцефаліт; септичний стан; ураження шкіри, підшкірної клітковини, сполучної тканини (рідкісна локалізація інфекції); кон'юнктивіт (рідкісна локалізація інфекції). [25,26]

Після перенесеного захворювання у людини залишається нестійкий імунітет, так як пневмонія характеризується рецидивами. [11]

Профілактика зводиться до санітарно-профілактичних заходів. Специфічної профілактики немає. [11,13]

Для лікування пневмококової інфекції використовують антібіотікі- пеніцилін, тетрациклін та ін. Але у відповідь на застосування антибіотиків, пневмококи виробили до багатьох з них стійкість. Так, в країнах з широким застосуванням антибіотиків, рівень резистентності пневмококів до пеніциліну становить до 50% від усіх виділяються пневмококів, до тетрацикліну і левоміцетину - близько 30%. [26,28]

1.3 Проблеми та механізми резистентності пневмококів до антимікробних препаратів

Резистентність до пеніциліну

S. pneumoniae є прикладом мікроорганізму, який протягом тривалого часу залишався надзвичайно високочутливим до пеніциліну. Тому до недавнього часу пеніцилін (або ампіцилін) був препаратом вибору для лікування інвазивної пневмококової інфекції. Штами зі зниженою чутливістю зустрічалися в усьому світі, проте в Росії (Москва) їх кількість не перевищувала 10% всіх виділених від пацієнтів з менінгітом.

Резистентність S.pneumoniae до антибактеріальних препаратів різко зросла і почала залучати пильну увагу з початку 90-х років [28, 29]. У деяких регіонах світу зустрічається до 35% пневмококів, що мають проміжну резистентність до пеніциліну [30]. Штами з резистентністю до трьох і більше класів антибактеріальних препаратів (бета-лактамів, макролідів, тетрацикліну і ін.) Називаються полірезистентними. Вони вперше були виявлені на півдні Африки [29], в даний час виявляються в багатьох країнах [22-24], їх кількість може досягати 25% всіх виділених штамів [12].

Механізм резистентності до пеніциліну пов'язаний зі зміною пеніцилінзв'язуючих білків (ПСБ). У S.pneumoniae виявлені шість високомолекулярних ПСБ, зміна трьох з них призводить до підвищення мінімальної переважної концентрації (МПК) пеніциліну, причому ступінь зміни ПСБ корелює з величиною МПК [25-30]. Зміна ПСБ відбувається в результаті музичних мутацій в хромосомі S.pneumoniae [41]. Є докази того, що деякі штами пеніцилін пневмококів (ПРП) стали такими в результаті передачі трансформованої ДНК від штамів сімейства зеленящіх стрептококів [22, 23].

Принципи лабораторної діагностики резистентних штамів. Висновок про резистентності пневмококів дається на підставі лабораторного дослідження штаму відповідно до стандартів National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Є два рівня резистентності пневмококів до пеніциліну: проміжний (МПК 0,12-1 мкг / мл) і резистентний (МПК 2 мкг / мл і вище) [24]. Пневмококки з МПК нижче 0,06 мкг / мл вважаються чутливими. Крім пеніциліну, досліджується чутливість штамів до цефтриаксону або цефотаксиму. Чутливі штами мають МПК? 0,25 мкг / мл, штами з проміжною резистентністю - від 0,5 до 1 мкг / мл, резистентні? 2 мкг / мл [25]. Нещодавно внесені зміни щодо резистентності пневмококів до амоксициліну: чутливими вважаються штами з МПК? 2 мкг / мл, проміжно резистентними - з МПК 4 мкг / мл і резистентними - з МПК> 4 мкг / мл [26]. У разі використання тільки диско-дифузійної методу висновок про чутливість конкретного штаму не може бути остаточним, штам вважають ймовірно резистентний і для уточнення повинен бути досліджений за допомогою методу серійних розведень або Е-тесту.

Останнім часом передбачається, що МПК до пеніциліну збудників, виділених від пацієнтів з інфекціями нижніх дихальних шляхів, можуть бути змінені в бік збільшення: чутливі? 1 мкг / мл, проміжно резистентні = 2 мкг / мл і резистентні? 4 мкг / мл [47]. Щодо пацієнтів з менінгітом і бактериемией таких пропозицій не висловлюється.

Резистентність до інших бета-лактамних антибіотиків. Механізм дії всіх бета-лактамних антибіотиків опосередкований взаємодією з ПСБ. Тому все резистентні до пеніциліну пневмококи мають підвищені МПК щодо та інших бета-лактамних антибіотиків. МПК пневмококів з проміжною резистентністю виявляється в 8-16 разів вище, ніж у штамів, чутливих до пеніциліну. Додаткове чотириразове збільшення МПК відзначається у штамів з високим ступенем резистентності. У той же час різні бета-лактами відрізняються за активністю щодо пневмококів, наприклад, активність цефотаксиму і цефтриаксону вище активності цефазоліну і Цефаклор, тому МПК останніх вище як по відношенню до чутливих штамів, так і по відношенню до штамів з проміжною резистентністю і резистентних [27] . Виявлено лінійну залежність між активністю цефуроксиму, амоксициліну, амоксицилін / клавуланату, Цефаклор, лоракарбефа, цефіксиму, цефподоксима, цефтриаксона і МПК пеніциліну відносно пневмококів [17]. Іншими словами, існує майже повна перехресна резистентність бета-лактамних антибіотиків щодо S.pneumoniae.

Резистентність до інших груп антибіотиків. Нещодавно показано, що S.pneumoniae можуть бути стійкими і до інших препаратів: 25% штамів резистентні до триметоприм / сульфаметоксазол, 19% - до макролідів, 14% - до тетрацикліну, 7% - до хлорамфеніколу, 6% - до кліндаміцину [28] . Найбільш високу резистентність до НЕ бета-лактамних антибіотиків проявляли штами, які мали високу резистентність до пеніциліну. Однак ці уявлення не можна механічно переносити однаково на все не бета-лактамні препарати, так як їх механізми резистентності різні. Зазначені варіанти полірезистентності пов'язані з поширенням штамів, що мають конкретні біологічні особливості, сформовані в результаті багатьох факторів, найважливішим з яких є політика застосування пероральних антибіотиків.

До теперішнього часу ванкоміцин залишається високоефективним препаратом щодо S.pneumoniae. Проте недавно був описаний клінічний ізолят з високою стійкістю до ванкоміцину. Для його придушення була потрібна концентрація, в 16-32 рази перевищує МПК [29]. Згідно МПК активність макролідів відносно S.pneumoniae різна: кларитроміцин приблизно в 2 рази активніше еритроміцину, останній в 2 рази активніше азитроміцину [28]. При цьому кількість штамів, резистентних до кожного з цих антибіотиків, приблизно однаково. За відсутності достовірних клінічних даних про порівняльної ефективності цих препаратів вважається, що кларитроміцин більш ефективний, ніж азитроміцин при важких пневмоніях, викликаних пневмококами. Резистентність пневмококів до макролідів у 75% штамів пов'язана з наявністю механізму посиленого викиду (Еффлюкс) антибіотика з клітки і у 25% - зі зміною в рибосомах. Наявність Еффлюкс призводить до резистентності зі значенням МПК 1-32 мкл / мл, а порушення в рибосомах - до високого рівня резистентності - МПК? 64 мкл / мл [48, 50]. З'являються докази того, що мутантні штами з механізмом інфлюкса можуть бути придушені кларитроміцином - макролідом з найбільшою активністю щодо S.pneumoniae і кращим фармакокинетическим профілем. В даний час три препарати групи фторхінолонів можуть бути використані для лікування важких інфекцій, викликаних S.pneumoniae: левофлоксацин, гатифлоксацин і моксифлоксацин. Всі три препарати мають однаковий фармакокінетичний профіль, in vitro активність моксифлоксацину в 2 рази вище гатифлоксацину, а останній - в 2 два рази активніше левофлоксацина [21-30]. Ці препарати призначені майже виключно для лікування інфекцій дихальних шляхів.

Новими препаратами, які можуть знайти застосування в лікуванні інвазивної пневмококової інфекції, є хінупристин / дальфопристин (сінерцід) - препарат групи стрептограмінів для парентерального застосування [23, 24] і лінезолід - препарат групи оксазолідінонов [25, 26]. Висока активність щодо S.pneumoniae була показана в обох препаратів, проте клінічний досвід їх застосування залишається обмеженим.

Клінічне значення резистентності S.pneumoniae. Найбільша кількість резистентних штамів пневмококів виділяється від пацієнтів з гострим середнім отитом і гайморитом, найнижче кількість резистентних ізолятів було отримано від пацієнтів з інвазивної інфекцією з крові і нормально стерильних порожнин організму [28]. При аналізі вікового складу пацієнтів було показано, що найбільша кількість резистентних штамів було виділено від пацієнтів раннього дитячого та похилого віку. Антимікробна резистентність пневмококів широко варіювала в залежності від географічного регіону, де проводилося дослідження.

Більшість резистентних штамів S.pneumoniae відноситься до одного з капсульних серотипів (B6, 9V, 14, 19f, 23F) [27-30]. Серотипи, що мають більш низькі порядкові номери (1, 3, 4, 5), зазвичай були чутливі до бета-лактамних і іншим групам антибактеріальних препаратів, причому саме ці штами найбільш часто викликають інвазивні жізнеугрожающіе інфекції.

Проблема лікування інвазивної та неінвазивної пневмококової інфекції тісно пов'язана з поширеністю резистентних штамів. Публікацій, присвячених узагальненню клінічного значення резистентності пневмококів, до теперішнього часу трохи [27, 30]. Найважливішою проблемою є вибір препаратів для емпіричної терапії пневмококів з проміжною резистентністю або резистентних. Такими препаратами можуть бути ті препарати, які зазвичай розглядаються як альтернативні. Відносно пацієнтів з інвазивної пневмококової інфекцією виникає питання про необхідність емпіричного застосування ванкоміцину і рифампіцину. Існуючий розподіл пневмококів по відношенню до пеніциліну на чутливі, проміжно резистентні і резистентні однозначно не відповідає на питання, як використовувати ці дані для лікування пацієнтів з менінгітом? Це пов'язано з тим, що застосування пеніциліну, навіть в масивних ( "менінгітном") дозах при інфекціях, викликаних пневмококами з проміжною резистентністю і резистентністю буде приводити до неефективності етіотропної терапії. Легко уявити, що зниження пенетрации пеніциліну в субарахноїдальний простір на тлі зменшення запалення оболонок мозку може призводити до такого рівня препарату, який не зможе пригнічувати ріст пневмококів зі значно підвищеною МПК.

Відносно пневмококової бактеріємії необхідно зауважити, що пацієнти, інфіковані штамами з МПК нижче 2 мкг / мл, задовільно відповідають на лікування звичайними дозами пеніциліну (1-2 млн ОД внутрішньовенно через 4 ч).Однак однозначних рекомендацій по лікуванню бактериемий, викликаних резистентними штамами немає, як і по відношенню до пацієнтів з емпієма плеври.

Необхідно відзначити, що чинники ризику розвитку пневмококової інфекції одночасно можуть грати роль факторів прогнозу результату важкої інвазивної інфекції. Може бути, тому з'являються обмежені дані, що вказують на однакову летальність пацієнтів з інвазивної пневмококової інфекцією, викликаної чутливими і резистентними до пеніциліну штамами в разі застосування як пеніцилінів, так і цефалоспоринів [12-25].

Тактика антибактеріальної терапії інвазивної інфекції S.pneumoniae. Багато резистентні до пеніциліну пневмококи можуть бути також резистентними до інших антибактеріальних препаратів (еритроміцин, цефалоспорини, фторхінолони, триметоприм / сульфаметоксазол). Високий рівень резистентності до пеніциліну і полірезистентність є реальною проблемою лікування інфекції. Пацієнти з інфекцією, викликаної резистентними штамами пневмококів, можуть зажадати застосування більш дорогих антимікробних препаратів, більшої тривалості лікування, що призводить до зростання витрат, пов'язаних з лікуванням. Тим більше, що відповіді на питання про вплив резистентності пневмококів на летальність від цієї інфекції поки не отримано.

З урахуванням всіх протиріч, пов'язаних з резистентністю пневмококів, мабуть, необхідно дотримуватися певних принципів лікування пацієнтів з інвазивної пневмококової інфекцією, наведених у таблиці.

Крім цього, у зв'язку з швидкоплинним розвитком захворювання (2-3 дні), часу на спеціальне визначення чутливості до антибіотиків, як правило, немає і пацієнти з важкими інфекціями нерідко гинуть незважаючи на введення стандартних антибактеріальних препаратів. Тому метою моєї роботи є провести порівняльний аналіз лабораторних методів дослідження носійства пневмококової інфекції та виявити найбільш інформативний і доступний метод.

Порівняльний аналіз лабораторних методів дослідження носійства пневмококової інфекції.

Матеріал для дослідження:

· Сльози, пунктати (при підозрі на пневмонію); гнійневідокремлюване, пунктати (середній отит, синусит); кров (менінгіт, менінгоенцефаліт); кров (септичні стани); виділення з рани (шкірні ураження); секційний матеріал - культуральні дослідження, виявлення ДНК мікроорганізму;

1.4 Бактеріологічний метод

пневмококової інфекція антимікробний лабораторний

«Золотим стандартом» є виділення збудника. Слід пам'ятати, що матеріал необхідно досліджувати швидко, тому що бактерії схильні до швидкого аутолизу, зумовленого активністю внутрішньоклітинних ферментів. Матеріалом для дослідження є мокротиння, плевральнийвипіт та інші ексудати, спинномозкова рідина, кров, слиз з носа і зіву, виділення очних виразок, виділення з вуха, сеча, шматочки органів (в разі смерті хворого). Сигнальний відповідь на пневмококової інфекцію може бути виданий при виявленні в мазках з харкотиння нейтрофілів і грампозитивних ланцетовідних диплококков (не менше 10 в полі зору). В іншому випадку вдаються до виділення збудника. [11]

Перший етап дослідження. Патологічний матеріал піддають попередній бактеріоскопії (крім крові). Мокротиння поміщають в стерильну чашку Петрі, відмивають, петлею захоплюють гнійно-слизовий грудочку, розтирають на предметному склі, висушують і фарбують по Граму. В мазку виявляють грампозитивні ланцетовидной або овальної форми коки, оточені капсулою (капсулоутворення спостерігається тільки у пневмококів, виділених від хворих і заражених тварин). Виявлення капсул пневмококів можна проводити за методом Буррі-Гінса. Посів патологічного матеріалу виробляють на 5-10% кров'яний або сироватковий агар і на середу збагачення (8-10% сироватковий бульйон). При підозрі на сепсис пневмококової природи 5-10 мл крові хворого засівають на 45-90 мл сироваткового бульйону. [24,26] Спинно-мозкову рідину, якщо вона прозора, центрифугують і кілька крапель з осаду засівають на поживні середовища. Як середовище збагачення використовують напіврідкий сироватковий агар. Посіви інкубують при 37 ° С 24 години. Кращим методом виділення чистої культури пневмококів є зараження білих мишей патологічним матеріалом. [24] Мокротиння, відмиту в чашці Петрі стерильним фізіологічним розчином, розтирають у стерильній ступці стерильним товкачем або битим склом при додаванні фізіологічного розчину в співвідношенні 1: 2-1: 5. Суспензія відстоюють, надосадову рідину в кількості 0,5-1 мл вводять білим мишам внутрішньоочеревинно. При наявності в матеріалі пневмококів миші гинуть протягом 72 годин. В мазках з органів і крові виявляють типові пневмококи. Також проводять посів органів і крові на сироватковий бульйон і на чашки Петрі з кров'яним або сироватковим агаром. [24-28] Другий етап дослідження. Вивчають характер росту на живильних середовищах. На кров'яному агарі колонії пневмококів дрібні, круглі, з рівними краями, ніжні, оточені зоною позеленіння середовища (що вельми нагадує зростання зеленящіх стрептококів). На сироватковому агарі колонії ніжні, напівпрозорі і прозорі. При бактеріоскопії мазків, забарвлених по Граму. виявляють грампозитивні диплококи без капсул. Після бактеріоскопії колонії, підозрілі на пневмококи пересівати на скошений сироватковий або кров'яний агар або на сироватковий бульйон. При мікроскопії мазків з середи збагачення поряд з різною мікрофлорою можна виявити коки, розташовані парами або короткими ланцюжками. Матеріал з середи збагачення пересівати на щільні поживні середовища. Посіви інкубують при 37 ° С 24 години. [24-28]

Третій етап дослідження. Па скошеному кров'яному агарі пневмококи утворюють ніжний тонкий напівпрозорий наліт. На сироватковому бульйоні пневмококи викликають помутніння і легкий осад. В мазках з щільних поживних середовищ пневмококи можуть мати різний вигляд. Поряд з диплококами подовженої форми з загостреними зовнішніми кінцями, що нагадують полум'я свічки, зустрічають клітини правильної овальної і круглої форми. У бульонной культурі пневмококи часто розташовуються ланцюжками. На підставі морфологічних і культуральних властивостей пневмококи важко відрізнити від зеленящіх стрептококів, тому для їх диференціювання запропонований набір спеціальних тестів:

* Розчинність в жовчі (дезоксіхолатная проба);

* Здатність розкладати інулін;

* Чутливість до оптохіну;

* Реакція аглютинації зі специфічними антипневмококовими сироватками;

* Здатність розкладати глюкозу, мальтозу, сахарозу, лактозу, маніт, сорбіт і салицин.

Найбільш доступними методами, диференціюючими пневмококи від інших стрептококів є проба з оптохіном (пригнічує їх ріст); від зеленящіх стрептококів їх відрізняє здатність ферментувати інулін, а також чутливість до жовчі. [23-30]

Дезоксіхолатная проба. Після попередньої бактеріоскопії в пробірку з 5 краплями стерильною бичачої жовчі вносять 10 крапель, виділеної чистої культури (краще бульонной). Контролем служить культура, внесена в пробірку з 5 краплями фізіологічного розчину. Через 30-60 хвилин інкубації при 37 ° С спостерігають повний лізис культури у вигляді просвітлення в пробірці з жовчю, в контрольній пробірці суміш залишається каламутною. Слід пам'ятати, що авірулентние культури пневмокока стійкі до жовчі.

Стійкість до жовчі також можна перевіряти посівом в 10% жовчний бульйон. У середу вносять досліджуваний матеріал, при цьому бульйон мутніє. Після 24-годинної інкубації при 37 ° С на наявність пневмококів вкаже просвітлення бульйону в результаті лізису бактерій.

Також можна використовувати диски, просочені 20% розчином жовчі. Диски завадять на виросла культуру в чашці і інкубують 1-2 години при 37 ° С. При наявності пневмококів колонії лизируются навколо диска на відстані 1 -2 мм. [11]

Проба на інулін. Культуру пневмокока засівають на середу з інулін. Для цього до 100 мл прогрітій при 56 ° С протягом 30 хв бичачої сироватки додають 200 мл стерильної дистильованої води, 18 мл лакмусовим настоянки і 3 г інуліну, стерилізують текучою парою 30 хвилин. Посіви інкубують при 37 ° С 24 години. Пневмококк розкладає інулін, в результаті серед червоніє. Зеленящий стрептокок не викликає почервоніння середовища. [11]

Проба з оптохіном. Випробувану культуру пневмокока засівають на сироватковий бульйон з оптохіном в розведенні 1: 100000 або 1: 200000. Пневмококк на такому середовищі не росте. Також можна визначити чутливість до оптохіну і посівом на 10% кров'яний агар, що містить оптохін в розведенні 1: 50000. Контролем є посів культури на кров'яний агар. Пневмококки не ростуть на середовищі з оптохіном, на контрольному середовищі спостерігається зростання пневмококів. Можна використовувати диски, просочені 6 мкг оптохіна, які накладають після посіву на поверхню середовища. У пневмококів навколо диска утворюється зона затримки росту не менше 18 мм діаметром. [11]

Проба на вірулентність. Добову культуру пневмокока, вирощену на сироватковому бульйоні розводять 1% стерильної пептонною водою (рН - 7,6) або слаболужним бульйоном до 1:10. Розведену культуру вводять внутрішньочеревно білим мишам вагою 16-20 гр в обсязі 0,5 мл і спостерігають протягом 72 годин. З органів загиблої миші роблять висіву на поживні середовища та микроскопируют мазки-відбитки. До високовірулентних культурам відносять пневмококи, що викликають загибель мишей після введення культури в розведенні 1:10. Авірулентние культури не викликають загибелі мишей. [12,14]

Незважаючи на очевидні переваги бактеріологічного методу дослідження, швидкість отримання результату і його чутливість є порівняно невисокими, що стало стимулом розробки нових діагностичних підходів, включаючи полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) і різних модифікацій серологічних тестів [23].

Серотіпірованіе пневмококів. 18-годинну культуру перевіряють в реакції мікроаглютинації по Себіна. На предметне скло наносять 4 краплі культури пневмокока. До 1 краплі додають краплю антипневмококковой сироватки типу 1, до 2-ї - сироватку типу II, до 3-й - сироватку - 111, до 4-ї - краплю нормальної сироватки. Суміші на склі перемішують петлею і розглядають під лупою або під мікроскопом при малому збільшенні. У позитивному випадку в одній з перших трьох крапель спостерігається аглютинація. [23] Тип пневмокока визначають в реакції аглютинації зі специфічними аглютинативна сироватками перших трьох фіксованих типів. Культури, що не агглютинируются зазначеними типами сироваток, відносять до Х-групі. Реакцію ставлять в такий спосіб. Розливають 18 - годинну бульонную культуру по 0,5 мл в пробірки. Потім вносять в рівному обсязі сироватки, розведені фізіологічним розчином у співвідношенні 1: 5. Контролями служать 2 пробірки, одна з яких містить випробувану культуру в суміші з нормальною кролячій сироваткою, а інша - тільки досліджувану культуру. Вміст пробірок ретельно струшують і ставлять на 2 години в термостат при температурі 37 ° С, після чого проводять попередній облік реакції. Остаточні результати відзначають після додаткового витримування при кімнатній температурі протягом 20 годин. Аглютинацію оцінюють на чотири плюса, якщо вміст пробірок повністю прояснюється, а агглютінаціонние культура являє собою щільну плівку, не розбивати при струшуванні; на три плюса якщо при повному просвітління вмісту пробірки агглютинируют культура легко розбивається на частини; на два плюса - якщо просвітлення не настає, в каламутному вмісті пробірки добре видно неозброєним оком частки агглютініровалісь культури; при аглютинації на один плюс в пробірці виявляють мелкозернистую суміш склеєних пневмококів. При негативній реакції, видимої оком, аглютинації не спостерігають; вміст пробірок після струшування є рівномірною муть. [23,28]

Типування пневмококів Х-групи проводять за допомогою групових сироваток, що містять суміш типових агглютинирующих сироваток, взятих в рівних обсягах.Готують такі групові сироватки шляхом змішування рівних об'ємів нерозведених типових діагностичних сироваток (Lund, I960):

· А -1, II, IV, V, XVIII серовар;

· В - VI, VIII, XIX серовар;

· З - VII, XX. XXIV, XXXI, XLсеровари;

· D - IX, XI, XVI, XXXVI. XXXVII серовар;

· Е - X, XXI. XXXIII, XXXIX серовар;

· F- XII. XVII. XXII, XXXVII, XXXII, XLI серовар;

· G- XIII, XXV. XXIX, XXXIV, XXXV, XXXVIII, XLII, XLVII серовар;

· J-XLIII. XLIV, XLV, XLVI серовар. [23]

Агглютинируют сироватку III типу використовують perse (без змішування з іншими типовими сироватками) через труднощі її отримання в досить високому титрі. Типування проводять в два прийоми: спочатку за допомогою групових сироваток, а потім з індивідуальними сироватками тієї групи, з якою була отримана позитивна реакція. Серотіпірованіе пневмококів застосовують переважно для епідеміологічних досліджень результатів специфічної серотерапії і серопрофилактики. [11-17]

Мікроаглютинації пневмококів за методом Себіна можна отримати при змішуванні антіпневмококкових сироваток з ексудатом з черевної порожнини миші, зараженої мокротою хворого. Уже через чотири години після зараження в ексудаті виявляють чисту культуру пневмококів, що дає позитивну агглютинацию по Себіна. [11-17]

Прискорені методи виявлення і типування пневмококів.

1. Метод Нойфельд або феномен набухання капсули пневмокока. По одному грудочки свежевиделенних мокротиння хворого наносять на три покривних скла, до кожного з них додають краплю нерозведеної специфічної антипневмококковой сироватки (1, II, IIIтіпов) і краплю синьки Леффлера. Краплі ретельно змішують, покривають предметним склом з лункою, змащеній по краях вазеліном. Через дві хвилини розглядають висячі краплі під мікроскопом з иммерсионной системою. При позитивному випадку видно різке збільшення капсул пневмококів. При негативному результаті капсули ледь заповітний. Реакція набухання специфічна і не дає позитивного результату з іншими капсульними бактеріями. Її не застосовую г для дослідження мокротиння від хворих, які лікувалися сульфаніламідами і антибіотиками, тому що в цьому випадку можуть виділятися безкапсульние пневмококи. [11,15]

До переваг даної методики відноситься її швидкість, а до недостаткам- необхідність виділення чистої культури і недостатня чутливість (не всі штами мають капсулу) [23].

2. Метод преципітації. 5-10 мл мокротиння кип'ятять на водяній бані до отримання щільного згустку. Згусток розтирають і додають невелику кількість фізіологічного розчину, знову кип'ятять кілька хвилин для добування специфічного полісахариду з пневмококів. Суспензія центрифугируют, з отриманої прозорою рідиною і специфічними типовими сироватками в преціпітаціонних пробірках ставлять реакцію кольцепреціпітаціі. Поява кільця на кордоні дотику рідин вказує на позитивний результат [11,15].

3. Визначення капсул пневмококів по Буррі. На кінець предметного скла наносять краплю досліджуваного матеріалу і краплю туші. Суміш перемішують і роблять мазок, висушують на повітрі і, не фіксуючи, микроскопируют. Фон препарату - темно-димчастий, мікробні тіла і їх капсули не фарбується. Препарат, виготовлений по Буррі, можна зафіксувати сумішшю Никифорова, промити водою, пофарбувати фуксином Циля, розведеним 1: 3 протягом 3-5 хвилин. На темному тлі мазка виділяються нефарбовані капсули, всередині яких знаходяться бактерії яскраво малинового кольору (метод Гінса) [11,16].

Існують також розробки виявлення пневмококових антигенів за допомогою зустрічного іммуноелектрофореза, іммунофлюоросцентного і імуноферментного аналізів. Хоча ці методи мають певні переваги, їх вартість, трудомісткість і порівняно низька чутливість і специфічність є основними обмеженнями до їх широкого використання в рутиною практиці [23]. Методики виявлення пневмококових аутолізіна і пневмолізіна в клінічному матеріалі з поощью ПЛР знаходяться на стадії розробки. У нещодавно опублікованому дослідженні чутливість ПЛР на аутолізін і пневмолізін склала, відповідно, 82% і 89%, а специфічність - 38% і 27% [23]. Внаслідок низької специфічності ПЛР, даний метод в даний час розглядається тільки як перспективний, але вимагає подальшого удосконалення [23].

В останні роки все більшої популярності набуває імунохроматографічним експрес-тест для виявлення пневмококової клітинного полісахариду (С- полісахариду) в сечі. Він являє собою нітроцелюлозну мембрану з абсорбувати на ній кролячими антипневмококовими антитілами і має діагностичний поріг 0.5 нг / мл. Виконання дослідження займає близько 15 хв; чутливість тесту складає 86% і спеціфічность- 94%. Ряд міжнародних товариств вже рекомендує його як додатковий метод діагностики пневмококової пневмонії [23].

Сучасні підходи до профілактики цих інфекцій. У 1911 році група А.Райта розробила неочищену цельноклеточной пневмококової вакцину, яка була використана для імунізації золотошукачів в Південній Африці. Результати показали деякі зниження частоти пневмонії і летальних випадків від неї вакцинованих порівняно з неімунізованих особами. Після опису в 1923р. М.Хейдельбергом і О. Евері полисахаридного будови капсули, вже в 1927р. О.Шіманном і В.Каспером було встановлено на тваринної моделі, що введення пневмококових полісахаридів стимулює імунітет. Пізніше до 1945р. Стало можливо проведення С.Мак Леода першого успішного клінічного дослідження тетравалентной пневмококової вакцини у військовому тренувальному таборі. Приблизно в цей же час в клінічну практику були впроваджені антимікробні препарати, активні у відношенні пневмококів, що призвело до значного поліпшення результатів терапії.

Роботи в області створення пневмококових вакцин були припинені до клінічного опису Р.Аустріаном і Дж.Голдом в 1964р. Не дивлячись на підвищення виживання пацієнтів з пневмококової пневмонії летальність залишалося на рівні 25% при наявності бактеріємії і була найвищою у літніх і осіб з хронічними захворюваннями. Безпосереднім результатом цих досліджень стало відновлення робіт по розробці полівалентних полісахаридних пневмококових вакцин, які були оцінені в подвійних сліпих, рандомізованих дослідженнях у золотоікателей в Південній Африці. Їх результати підтвердили ефективність вакцинації для профілактики пневмонії, що призвело до ліцензування в 1974р. 14-валентної вакцини, що містить 50 мкг капсулярного полісахариду кожного серотипу, в неї входить. У 1981 р. Ця вакцина була замінена на 23-валентну, що містить по 25 мкг очищених капсулярних полісахаридних антигенів серотипів 1,2,3,4,5, 6B, 7F, 8,9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14,15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20,22F, 23F, 33F, яка використовується і в даний час. Пневмококки цих серотипів за даними епідеміологічних досліджень в різних країнах світу викликають до 90% інвазивних інфекцій у дорослих.

Пневмококові капсулярні полісахаридні антигени стимулюють вироблення сератіпоспеціфічних антитіл, які, в свою чергу, підвищують ефективність опсонізації, комплементзавісімий фагоцитоз і руйнування пневмококів лейкоцитами і іншими фагоцитуючими клітинами. Концентрації цих антитіл починають зростати протягом першого тижня після вакцинації і, для більшості входять до вакцину антигенів, перевищують допрівівочние титри у здорових дорослих протягом> 5 років.

Імунна відповідь до всіх 23 серотипом входять в вакцину, в значній мірі і варіабільним. Не дивлячись на те, що адекватна імунна відповідь на вакцину відзначається і у пацієнтів у віці? 85 років, її більш низька ефективність може бути пов'язана з функціональними відмінностями антитіл у літніх і більш молодих осіб. Важлива роль в імунній відповіді на полісахаридні антигени належить і генетичним фактором. Клінічну значимість поствакцинальних титрів антитіл складно визначити внаслідок відсутності чіткого визначення захисних рівнів. Крім того, при вимірі концентрації антитіл не береться до уваги функціональна активність антитіл. Лабораторні методи, що оцінюють функціональність імунної відповіді, наприклад, опсонофагоцітарную активність і різновид антитіл, потенційно можуть бути більш значущими і достовірними для оцінки захищеності в порівнянні з простим вимірюванням рівня антитіл.

Постліцензійні епідеміологічні дослідження підтвердили ефективність пневмококових полісахаридних вакцин для профілактики інвазивних інфекцій (бактеріями і менінгіту) у літніх осіб і пацієнтів 2 років певними хронічними захворюваннями.

На підставі 25-річного клінічного досвіду використання пневмококові полісахаридні вакцини в цілому вважаються безпечними.

Згідно з рекомендаціями Комітету радників по Іммунізаціонной практиці (ACIP), вакцинація рекомендується особам? 65 років з високим ризиком розвитку цих інфекцій, а також від 2 до 64 років з наявністю певних хронічних захворювань. Вакцинація також рекомендована особам з невідомим імунізаційна статусом.

Як зазначалося раніше, частота інвазивних пневмококових інфекцій є найвищою у дітей у віці до 2 років. На жаль, пневмококової поліса вакцина являє собою Т-незалежні антигени, і, як наслідок, недостатньо стимулює імунну відповідь у дітей в цьому віці.

Багатообіцяючим альтернативним підходом до профілактики цих інфекцій є розробка вакцин до некапсульним антигеном, загальним для всіх пневмококових серотипів. Білковими антигенами, використовуваними для подібної мети, є: нейрамінідаза, аутолізін, пневмолізін, пневмококові поверхневі протеїни, А і С (PspA і PspC), пневмококової поверхневої адгезин А (PsaA). Ці білки теоретично можуть забезпечувати не тільки захист проти всіх пневмококових серотипів, але і приводити до стимуляції Т-залежного відповіді з розвитком імунологічної пам'яті.

Таким чином, необхідно відзначити, що в даний час існують ефективні шляхи специфічної профілактики інвазивних пневмококових інфекцій у дорослих і дітей. Однак перед широким використанням полисахаридной вакцини в РФ, необхідно проведення багатоцентрових епідеміологічних досліджень за визначенням переважаючих серотипів пневмококів, що викликають інвазивні і неінвазивні інфекції в різних регіонах. Тільки такі результати дозволять визначити можливу ефективність вакцин з точки зору принципів доказової медицини.

Епідеміологічний нагляд за інвазивними пневмококової інфекції - комплексне спостереження за епідемічним процесом на певній території і в конкретний період часу з метою організації профілактичних, протиепідемічних і лікувальних заходів. Ця робота здійснюється за спільної участі епідеміологів, клініцистів, лікарів-бактеріологів, медичних статистиків і організаторів охорони здоров'я.

Основними завданнями епідеміологічного нагляду за інвазивними пневмококової інфекції є оцінка епідеміологічної ситуації, ретроспективний епідеміологічний аналіз захворюваності інвазивними пневмококової інфекції, створення умов для адекватного проспективного спостереження за захворюваністю пневмококові менінгітом і іншими формами інвазивних пневмококових інфекцій; вироблення рекомендацій для проведення найбільш раціональних заходів боротьби з ИПИ. Оскільки найбільш радикальним заходом боротьби з інвазивними і неінвазивними пневмококовими інфекціями, є вакцинопрофілактика, епідеміологічний нагляд повинен послужити підставою для вирішення питання про проведення вакцинопрофілактики, виборі місця, часу і порядку її проведення, і, в разі прийняття рішення, повинен дозволити контролювати зміна епідеміологічної ситуації в внаслідок виконання програм вакцинації.

Організація системи епідеміологічного нагляду за інвазивними пневмококової інфекції передбачає розуміння актуальності проблеми пневмококових інфекцій, клінічних та епідеміологічних особливостей клініцистами та епідеміологами, вдосконалення діагностики ГБМ у дітей, в тому числі за рахунок впровадження некультуральних методів діагностики.

Санітарно-освітні заходи в системі профілактики пневмококової інфекції. Інформування фахівців про можливості і доцільності вакцинопрофілактики пневмококової інфекції має ґрунтуватися на фактах і принципах, викладених в даних методичних рекомендаціях, і здійснюватися в різних формах і на різних рівнях: федеральному (організація наукових конференцій, секцій на з'їздах і конгресах, видання монографій і посібників, публікацій в медичній періодиці), регіональному (проведення нарад за участю фахівців різного профілю, проведення навчальних шкіл і семінарів для організаторів охорони здоров'я, бактеріологів, інфекціоністів, педіатрів та імунологів).

Рекомендується посилення загальних санітарно-просвітніх та інформаційно-роз'яснювальних заходів, при яких батьки отримують інформацію про пневмококової інфекції та можливості її вакцинопрофілактики безпосередньо на прийомі у лікаря-педіатра, а також через засоби масової інформації, наочні посібники та роздаються інформаційні матеріали в дитячих поліклініках і прищепних кабінетах. Повинні бути роз'яснені: загальнопоширених пневмококової інфекції, різноманіття і тяжкість її клінічних проявів; наявність можливості запобігання захворювання пневмококової інфекцією, безпеку і ефективність вакцинації, показання, протипоказання і схема застосування пневмококової вакцини. Слід довести до відома батьків, що ймовірність захворювання пневмококової інфекцією підвищена: у дітей з багатодітних сімей, особливо якщо у новонародженого є брат / сестра на 1-4 роки старший; у дітей, які проживають в гуртожитках і / або комунальних квартирах, особливо якщо разом з новонародженим проживає дитина на 1-4 роки старший; у дітей з хронічними захворюваннями, а також у часто і тривало хворіючих дітей і у дітей з неврологически обтяженим фоном (родова травма, гіпертензіонний і судомний синдром, парези, відставання в розвитку) [5].

2. Практична частина

Для бактеріологічного дослідження в якості патологічного матеріалу я використовувала музейний штам S.pneumoniae.

Перший етап дослідження.

Зробила мазок на предметне скло і пофарбувала по Граму. В мазку виявила грампозитивні ланцетовидной або овальної форми коки, оточені капсулою. Справила посів матеріалу на 5-10% кров'яний і на середу збагачення (8-10% сироватковий бульйон). Посіви інкубували при 37 ° С 24 години.

Другий етап дослідження. Вивчила характер зростання на живильному середовищі. На кров'яному агарі колонії пневмококів дрібні, круглі, з рівними краями, ніжні, оточені зоною позеленіння середовища (що вельми нагадує зростання зеленящіх стрептококів). При бактеріоскопії мазків, забарвлених по Граму, виявила грампозитивні диплококи без капсул. Після бактеріоскопії колонії, підозрілі на пневмококи, пересівати на скошений сироватковий або кров'яний агар. При мікроскопії мазків з середи збагачення поряд з різною мікрофлорою виявила коки, розташовані парами або короткими ланцюжками. Матеріал з середи збагачення пересіємо на щільні поживні середовища. Посіви інкубіровла при 37 ° С 24 години.



Скачати 50.07 Kb.