Гепатопротекторні властивості флавоноїдів






    Головна сторінка





Скачати 104.76 Kb.
Дата конвертації01.12.2017
Розмір104.76 Kb.
Типреферат

АВТОРЕФЕРАТ

Дисертації на здобуття наукового СТУПЕНЯ

ДОКТОРА БІОЛОГІЧНИХ НАУК

Гепатопротекторні властивості ФЛАВОНОЇДІВ

(Фармакодинаміка і перспективи клінічного вивчення)

14.03.06 - ФАРМАКОЛОГІЯ, КЛІНІЧНА ФАРМАКОЛОГІЯ

на правах рукопису

Доркина ОЛЕНА ГРИГОРІВНА

Волгоград 2010


Робота виконана в Державному освітній установі вищої професійної освіти "П'ятигорська державна фармацевтична академія Федерального агентства з охорони здоров'я і соціального розвитку" і в Державному освітній установі вищої професійної освіти "Волгоградський державний медичний університет Федерального агентства з охорони здоров'я і соціального розвитку"

Науковий консультант: доктор медичних наук,

професор Тюренков Іван Миколайович

Офіційні опоненти:

Доктор біологічних наук, професор Дудченко Галина Петрівна

2. Доктор біологічних наук, професор Гарибова Таїсія Левоновна

3. Доктор медичних наук, Макляк Юрій Степанович

Провідна установа:

ГОУ ВПО "Саратовський державний медичний університет Росздрава"

Захист відбудеться "__" _________ 2010 року в ____ год. на засіданні спеціалізованої вченої ради Д 208.008.02 ГОУ ВПО "Волгоградський державний медичний університет Росздрава" (400131, м Волгоград, пл. Полеглих борців, 1)

З дисертацією можна ознайомитися в бібліотеці ГОУ ВПО "Волгоградський державний медичний університет Росздрава"

Автореферат розісланий "" 2010 г.

Вчений секретар

спеціалізованої вченої ради,

професор А.Р. Бабаєва

Актуальність проблеми

Ураження печінки різної етіології є досить широко поширеною патологією [Дробінський А. і співавт., 2002; Ільченко Л.Ю. і співавт., 2002 Полонський В.М., 2005]. За даними ВООЗ у світі - 2 млрд людей з патологією печінки, що в 100 разів перевищує поширеність ВІЛ-інфекції [Дроговоз С.М. 2009]. Серед широкого кола препаратів, які використовуються в комплексній терапії захворювань печінки, виділяють порівняно невелику групу "справжніх" гепатопротекторів, ефективність яких не завжди виявляється достатньою.

У патогенезі уражень печінки (токсичної, алкогольної та іншої етіології) велике значення відводиться окислювальному стресу [Буеверов А.О., 2002 Скворцов В.В., 2003 Іпатова О.М., 2005, Оковитий С.В., 2007, Fernandes-ChecaJ. C., 2003 LieberC. S., 2004, DeyA., CederbaumA.I., 2006]. При оксидативному стресі, в першу чергу, спостерігається зрушення про-антиоксидантної рівноваги в бік посилення прооксидантно складової, зниження резервів мобілізації антиоксидантної захисту, що пов'язане з порушенням енергозабезпечення клітини, детоксикаційних механізмів, активацією апоптозу, прозапальних цитокінів і ін. [Дубініна Є.Є. , 1998, Болдирєв А.А., 2001., Шаповал Г.С. і ін., 2003 Сазонтова Т.Г. і ін., 2007, Ланкин В.З. і ін., 2009 HanD. Etall., 2006]. Окислювальний стрес ініціює порушення, пов'язані з кровопостачанням печінки (пошкодження ендотелію судин і синусоидов печінки зі зміною вироблення оксиду азоту, погіршення реологічних властивостей крові, стану мікроциркуляторного русла та ін), що ускладнює перебіг патологічного процесу [Марков Х.М., 2005, LukivskayaO. etal., 2004, PầrvuA. E. etal., 2005, BabệlP. etal., 2006].

Многофакторность патогенезу уражень печінки вимагає, щоб і захист здійснювалася на різних рівнях і структурах, що визначає перспективність пошуку нових гепатопротекторів серед флавоноїдів, для яких виявлено понад 40 видів фармакологічної активності [RobakJ. etal., 1996]. Незважаючи на значне число робіт, присвячених вивченню гепатозащітним властивостей флавоноїдів, порівняльного вивчення ефективності їх дії не проводилося. Чи не з'ясовані до кінця і механізми їх гепатопротекторної активності. Більшість дослідників вважають, що основою такого є антиоксидантну дію [Чучалин В.С., 2003 Куркін В.А., 2003 Саратіков А.С. і ін., 2005, MiddletonE. JR. etal., 1996, 2000, RobackI. etal., 1996, Narayanaetal., 2001., NijveldtR.I. etal., 2001., HavsteenB. H., 2002]. В останні роки все більша увага приділяється дослідженню стану ендогенних систем антиоксидантного захисту [PuiggrosF. etal., 2005, Moskaugetal., 2005, Кравченко Л.В. і ін., 2005, FreiB., 2003].

Тому сьогодні актуальним є не тільки пошук нових ефективних і безпечних гепатозащітним препаратів, але і порівняльне вивчення особливостей і інтимних механізмів дії вже відомих гепатопротекторів.

Виходячи з цього, слід вважати важливим, як з наукової, так і з практичної точки зору, комплексне, порівняльне вивчення гепатопротекторної дії флавоноїдів, їх вплив на про-антиоксидантний баланс, системи антиоксидантного захисту, детоксикації та енергозабезпечення, ендотеліальну дисфункцію, продукцію оксиду азоту та печінковий кровотік, що і стало предметом цієї роботи.

Мета і завдання роботи

На підставі комплексної і порівняльної оцінки впливу флавоноїдів на основні метаболічні та гемодинамічні патогенетичні процеси при токсичних ураженнях печінки експериментально обґрунтувати створення нових ефективних вітчизняних гепатопротекторів.

Для досягнення цієї мети були поставлені такі завдання:

провести вивчення в порівняльному аспекті впливу лікувально-профілактичної дії гесперидину, діосміну, флавіціна, кверцетину, карсила і сухого екстракту (СЕ) з горошку рубленого (ViciaabbreviateFish. exSpreng. (ViciatruncatulaFish. ex. Bieb), що містить флавіцін, на розвиток синдромів цитолізу, холестазу , мезенхимального запалення і гепатодепрессіі, гістологічну картину печінки, інтенсивність перекисного окислення ліпідів (ПОЛ), стан систем антиоксидантного захисту (АОЗ), енергозабезпечення та детоксикації при експериментальному гострому ураженні пе чени СС1 4 і етанолом;

провести порівняльне вивчення антиоксидантної дії досліджуваних флавоноїдів invitro і їх впливу на інтенсивність ПОЛ, стан систем АОЗ, енергозабезпечення та детоксикації invivo при їх курсовому введенні в умовах норми;

провести порівняльне вивчення впливу флавоноїдів на вміст NO у інтактних тварин і при його надлишкової продукції, індукованої СС1 4, методом ЕПР;

вивчити в порівняльному аспекті вплив флавоноїдів на органний кровотік і функцію ендотелію в умовах норми і моделювання ендотеліальної дисфункції;

провести комплексне вивчення енергетичного обміну, інтенсивності ПОЛ і стану АОЗ, а також зміни печінкових показників і гістоморфологічної картини даного органу в ході хронічної алкоголізації і при лікувальному застосуванні найбільш активного гепатопротектора в порівнянні з Карсилом ®;

вивчити вплив найбільш активного гепатопротектора на розвиток фіброзу при хронічному ураженні печінки СС1 4, жовчоутворювальну функцію печінки в нормі і при експериментальному гепатиті і віддалені результати його лікування.

Наукова новизна отриманих результатів

Вперше проведено порівняльне, комплексне вивчення механізмів гепатопротекторного дії індивідуальних флавоноїдів, флавіціна і СЕ з трави горошку рубленого, їх вплив на процеси ПОЛ, системи АОЗ, детоксикації та енергообміну в умовах норми і патології печінки. Вперше встановлена гепатозащітним активність флавіціна, виділеного з оригінального рослинної сировини (надземна частина V. abbreviata), при токсичних ураженнях печінки СС1 4 і етанолом. Вперше показано існування тісного кореляційного взаємозв'язку між виразністю гепатозахисної дії і ступенем відновлення про-антиоксидантної рівноваги за рахунок не тільки прямого антиоксидантної дії флавоноїдів, а й підвищення активності ендогенної системи АОЗ у печінці.

Вперше виявлено, що курсове введення досліджуваних флавоноїдів має стимулюючий вплив на активність NADP + -редуктазних ферментів, які беруть участь в регенерації відновленого глутатіону, а застосування діосміну, флавіціна і кверцетину підвищує вміст GSH, який бере участь в механізмах підвищення неспецифічної резистентності організму до екстремальних факторів середовища.

Вперше показано, що введення гесперидину і флавіціна збільшує печінковий кровотік в умовах норми. Вперше проведено порівняльне вивчення коригуючого впливу флавоноїдів на органний кровотік в умовах ендотеліальної дисфункції, очевидно пов'язане з активацією eNOS і підвищенням продукції NO.

Методом ЕПР показано підвищення під впливом флавоноїдів змісту NO в нормі, і його зниження в умовах індукції окисного стресу введенням СС1 4, що свідчить про їх модулирующем вплив на продукцію NO.

Вперше встановлено, що СЕ з Viciaabbreviata, що містить 5,12 - 5,67% флавіціна, має більш ефективним гепатопротекторну дію, ніж препарат порівняння карсил, і вивчений механізм дії СЕ при профілактичному і лікувальному застосуванні, який пов'язаний з подоланням окисного стресу за рахунок підтримки функціонування ендогенної системи АОЗ, нормалізації енергопродукції і процесів детоксикації, гальмуванням процесу фиброгенеза при хронічної патології, відновленням желчеобразовательной функції печінки.

Вперше показано, що в ході хронічної алкоголізації відбувається посилення адаптаційно-захисних механізмів у вигляді підвищення активності ферментів NADPH-GSH-залежної системи, що значно більше виражено при лікувальному застосуванні СЕ з Viciaabbreviate.

Практична значимість

На підставі отриманих результатів виявлено в різному ступені виражений вплив флавоноїдів на патологічні синдроми, патогенетичні механізми ураження гепатоцитів: ПОЛ, систему АОЗ, детоксикації та енергоутворення, кровопостачання печінки, ендотеліальну дисфункцію. Такі дані дозволяють розробити рекомендації щодо диференційованого застосування флавоноїдів, як гепатопротекторів, при певному характері перебігу захворювання печінки. Сума, яка містить арабіноглюкозід - і ксілоглюкозід діосметіна, яка умовно названа флавіціном, може бути рекомендована для подальшої розробки як лікарський засіб для лікування уражень печінки. СЕ з V. abbreviata, який надає виражене гепатозащитное дію при гострих і хронічних токсичних ураженнях печінки, що перевершує карсил, а також перешкоджає розвитку фіброзу і стимулюючий секрецію жовчі, може бути використаний для створення лікарського препарату.

практичні рекомендації

З огляду на селективну токсичність ряду ліків по відношенню до ендотеліальних клітин синусоїдів печінки і найбільш виражену позитивну дію гесперидину на ендотеліальну функцію і печінковий кровотік, дане з'єднання може бути рекомендовано для корекції судинних уражень печінки. Ефективніше нормалізує вплив діосміна на холестаз може бути підставою для його рекомендації при захворюваннях печінки, що супроводжуються порушенням жовчоутворення. Кверцетин може бути рекомендований при ураженнях печінки, що супроводжуються вираженим цитолизом і мезенхімальних запаленням. Флавіцін і СЕ, є високоефективними гепатопротекторами при ураженнях печінки СС1 4 і алкоголем, можуть бути рекомендовані для розробки на їх основі лікарських засобів для лікування та профілактики захворювань печінки при гострих і хронічних отруєннях гепатотоксичними отрутами.

Рівень впровадження результатів дослідження

За даними, отриманим автором, підготовлені інформаційні листи, матеріали яких включені в плани НДР кафедр технології ліків (акт впровадження від 03.09.2007 р), органічної хімії (акти впровадження від 07.09.2007г. І від 04.11.2009), фармакогнозії (акт впровадження від 03.11 2009), фармакології (акт впровадження від 29.08.2007 р) та ботаніки (акт впровадження від 10.11.2009) П'ятигорської ГФА Росздрава. Матеріали, отримані автором, використовуються в санаторно-курортній практиці (санаторій ім.М.Ю. Лермонтова, м П'ятигорськ, акт впровадження від 20.08.2007). Результати роботи включені в лекційний матеріал для студентів лікувального, педіатричного, фармацевтичного, слухачів факультету удосконалення лікарів і провізорів на кафедрах фармакології, фармакології і біофармації ФУВ ВолГМУ, Курського державного медичного університету, Ставропольської державної медичної академії, Саратовського державного медичного університету. Дані з вивчення механізму дії і гепатозащітним активності сухого екстракту з горошку рубленого увійшли в комплект документів, переданих в ТОВ "Евалар" для подання до ФК МОЗ і СР на отримання дозволу до проведення клінічних випробувань.

Зв'язок з планом НДР ГОУ ВПО "П'ятигорська ГФА Росздрава"

Дисертаційну роботу виконано відповідно до плану науково-дослідних робіт ГОУ ВПО "П'ятигорська ГФА Росздрава" з проблеми "Вивчення біохімічних основ захисної дії флавоноїдів при експериментальному ураженні печінки" (номер державної реєстрації 01.200.11.7645), а також відповідно до плану науково-дослідних робіт Волгоградського Державного медичного університету і відповідає проблемі, номер державної реєстрації 01 200 800 804.

Апробація отриманих результатів

Основні положення дисертаційної роботи викладені на 55-й - 63-ій наукових конференціях "Розробка, дослідження і маркетинг нової фармацевтичної продукції" (П'ятигорськ, 2000-2008 рр.), На десятій Російської конференції "Гепатологія сьогодні" (Москва, 2005 р), на міжнародній конференції "Активні форми кисню, оксид азоту, антиоксиданти і здоров'я людини" (Смоленськ, 2005 р), на IV конференції гастроентерологів Південного Федерального округу (Кисловодськ, 2005р), на міжнародній науковій конференції "Молекулярні, мембранні і клітинні основи функцион вання біосистем "(Мінськ, 2006 р), на IX Українському біохімічному з'їзді (Харків, 2006 р).

Положення, що виносяться на захист

1. При гострих ураженнях печінки СС1 4 і етанолом більш вираженою гепатозащітним активністю в порівнянні з індивідуальними флавоноїдами і Карсилом ®, володіє СЕ з V. abbreviate (truncatula), який практично повністю усуває розвиток синдромів цитолізу, холестазу, мезенхімального запалення і печінкової недостатності, білкову та жирову дистрофії, а також більшою мірою відновлює про-антиоксидантну рівновагу, енергетичний обмін і активність систем детоксикації при лікувально-профілактичному введенні в дозі 300 мг / кг.

2. В умовах розвитку окисного стресу при гострих токсичних ураженнях печінки СС1 4 і етанолом виявлено в різного ступеня виражений вплив флавоноїдів і СЕ на ферментативне ланка системи АОЗ і пов'язані механізми клітинної захисту (енергообмін і детоксикацію).

3. Флавіцін invitro по силі антиоксидантної дії поступається кверцетину, але більш потужно активує АОЗ і перевершує кверцетин по ефективності гепатопротекція і підтримці рівноваги в системі ПОЛ / АОС. Відзначається досить тісний кореляційний зв'язок між виразністю гепатопротекція і коефіцієнтом окисного стресу, що характеризує про-антиоксидантний баланс. Звідси випливає, що більш важливе значення для захисту печінки має не просто зниження і придушення ПОЛ, а усунення дисбалансу в системі ПОЛ / АОС.

4. СЕ з Viciaabbreviate (truncatula) в дозі 300 мг / кг має виражену лікувальну дію при ураженні печінки, викликаному хронічною алкогольною інтоксикацією, посилюючи адаптаційно-пристосувальну захисну реакцію, що розвивається в ході алкоголізації при введенні етанолу, перевищуючи по ефективності карсил.

5. В результаті курсового введення досліджуваних флавоноїдів в ефективних гепатопротекторних дозах спостерігається активація ферментів, які беруть участь в регенерації відновленого глутатіону, і підвищується вміст GSH в печінці, що підвищує неспецифічну резистентність органу до дії факторів.

6. Досліджувані флавоноїди в нормі і при ендотеліальної дисфункції збільшують продукцію NO, ймовірно, шляхом активації eNOS, і підвищують печінковий кровотік, а також обмежують гиперпродукцию NOiNOS в печінці, стимульовану СС1 4, що в певній мірі обумовлює Гепатопротективна властивості флавоноїдів.

7. СЕ в дозі 300 мг / кг при лікувальному застосуванні на моделі хронічного СС1 4 -гепатіта зменшує розвиток фіброзу, а також покращує жовчоутворювальну функцію печінки в нормі і при патології печінки.

8. Висока ефективність СЕ, пов'язана з впливом на основні ланки патогенезу гострих і хронічних уражень печінки, наявність у нього більш вираженого лікувальної дії, ніж у карсила, дозволяє рекомендувати СЕ в якості субстанції для створення нового гепатопротекторного препарату.

публікації

За темою дисертації опубліковано 42 друкованих роботи з них 9 статей у наукових журналах, які входять до переліку рекомендованих ВАК РФ.

Структура і обсяг дисертації

Дисертаційна робота викладена на 351 сторінках тексту комп'ютерного набору і складається зі вступу, огляду літератури, матеріалів і методів дослідження, результатів власних досліджень (8 глав), висновків, загальних висновків, списку використаних джерел, додатків А, Б і В (55 сторінок). Робота ілюстрована 31 таблицею та 89 рисунками. Бібліографічний список включає 649 джерел, з яких 416 публікації іноземних авторів.

Матеріали і методи дослідження

Як об'єкти дослідження служили індивідуальні флавоноїди: кверцетин (фірми Merk), диосмин, гесперидин, виділені з рослинної сировини (Viciatanuifolia (variabilis) Roth. І шкірки цитрусових), сума, яка містить арабіноглюкозід - і ксілоглюкозід діосметіна, яка умовно названа флавіціном і СЕ, отримані з надземної частини горошку рубленого - ViciaabbreviateFish. exSpreng. (ViciatruncatulaFich. ExBieb), сем. бобових - Fabaceaeна кафедрі органічної хімії ГОУ ВПО "П'ятигорської ГФА Росздрава" під керівництвом доктора фармацевтичних наук, професора Е.Т. Оганесяна. За допомогою фізико-хімічних методів аналізу: температури плавлення, УФ-, ІЧ - та ПМР - спектроскопії, тонкошарової (ТШХ) і паперової (БХ) хроматографії, проби змішання, підтверджено будову виділених речовин [Хочава М.Р., 2001., Шаренко Про . М., 2005]. СЕ являє собою порошок темно-коричневого кольору з приємним специфічним запахом, що містить 5,12 - 5,67% флавіціна [Шаренко О.М., 2005]. Для стандартизації запропонований метод кількісного спектрофотометричного визначення суми флавоноїдів в сухому витягу при 410 нм, помилка якого знаходиться в межах 3,09-3,55%. Як препарат порівняння використовували карсил.

Досліди проведені на 1050 білих безпородних і лінії Wistar статевозрілих щурах обох статей масою 170-240 г. (по 10-12 тварин контрольних груп і 6-8 досвідчених груп) і 80 білих мишах обох статей масою 25-30 г. (по 10 мишей в групі). Тварини містилися в умовах віварію П'ят ГФА, Волгоградського державного медичного університету і державної установи "Російського кардіологічного науково-виробничого комплексу МОЗ РФ" м.Москва з природним світловим режимом на стандартній дієті [ГОСТ Р 50258-92], з дотриманням "Європейської конвенції про захист хребетних тварин, що використовуються для експериментів або в інших наукових цілях "[2007] і правил лабораторної практики при проведенні доклінічних досліджень в РФ [ГОСТ Р 51000.3-96, ГОСТ Р 51000.4-96]. Забій тварин проводився згідно вимог "Міжнародних рекомендацій щодо проведення медико-біологічних досліджень з використанням тварин" [2007].

Визначення ефективної дози проведено на моделі гострого CCl 4 -гепатітогепатоза, який відтворювали шляхом введення peros за допомогою зонда 3 рази через день 50% розчину CCl 4 в вазеліновій олії в дозі 0,15 мл / 100 г маси тіла тварини. Гесперидин, диосмин, флавіцін, кверцетин досліджували в діапазоні доз 25, 50, 100 і 200 мг / кг, СЕ - 100, 200, 300 і 500 мг / кг при пероральному введенні у вигляді водної суспензії по лікувально-профілактичної схемою: протягом 7 днів до CCl 4, а потім на тлі відтворення моделі (5 днів). Досліджувані флавоноїди і СЕ вводили щодня в один і той же час до годування тварин за 1 годину до введення гепатотоксинів. Встановлені ефективні дози були обрані для подальших досліджень і склали для індивідуальних речовин - 100 мг / кг (менше 1/60 від LD 50), для СЕ - 300 мг / кг (менше 1/20 від LD 50). Карсил вивчали в дозі 100мг / кг.

Гостре ураження печінки етанолом відтворювали курсової алкоголізацією щурів-самок шляхом 2-х кратної внутрішньочеревно ін'єкції 33% розчину етанолу на добу в дозі 0,75 мл / 100г маси тіла тварини протягом 7 днів [Спригін В.Г., Кушнєрова Н.Ф. , 2002]. Досліджувані флавоноїди, СЕ і карсил тваринам вводили в ефективних дозах за 5 днів до введення етанолу, а потім разом з ним (7 днів).

Курсове напування здорових тварин флавоноїдами, СЕ і Карсилом ® здійснювали протягом 12 днів в ефективних гепатопротекторних дозах.

Хронічну алкоголізацію проводили шляхом перорального введення 40% етилового спирту в дозі 14 мл / кг [Мансурова І.Д., 1985] протягом 60 днів. Лікувальна дія СЕ вивчали в дозі 300 мг / кг в порівнянні з Карсилом ® в дозі 100 мг / кг. Через добу після 60-денної алкоголізації (вихідний контроль), через 7, 14 і 21 день лікувального застосування СЕ і карсила проводили забій тварин дослідних і відповідних контрольних груп. Контролем служили тварини, які продовжували отримувати тільки 40% етанол в дозі 14 мл / кг також 7, 14 і 21 день.

Оцінку ефективності гепатозахисної дії проводили за ступенем нормалізації біохімічних показників основних патологічних синдромів, що спостерігаються при ураженнях печінки: цитолізу - активності в сироватці АлАТ, АсАТ, КФ, ФЛА 2, ГДГ, співвідношенню АсАТ / АлАТ; холестазу - активності в сироватці крові ЛФ, g-ГТП, змістом білірубіну і його фракцій (прямого і непрямого білірубіну), мезенхимального запалення - визначення білкових фракцій, співвідношення альбумін / глобуліни і тимолової проби в сироватці крові; печінково-клітинної недостатності, характеризуючи стан білково-синтетичної та метаболічної функцій печінки за показниками білкового (вміст загального білка, альбумінової фракції і активності ХЕ, змістом сечовини в сироватці крові), вуглеводного (вміст глюкози в крові та глікогену в печінці) і ліпідного (вміст холестерину, ТРГ в сироватці крові, вміст ТРГ і ФЛ в печінці) обмінів. В якості маркерів хронізації патологічного процесу в печінці визначали компоненти сполучної тканини: вміст у печінці загального оксипроліну (ОП) і зміст глікозаміногліканів (ГАГ) в сироватці крові. Крім цього, вивчали Гистоморфологические картину органу при фарбуванні препаратів гематоксиліном і еозином, пикрофуксином по Ван-Гизону для виявлення компонентів сполучної тканини і Суданом III для виявлення ліпідів. Мікрофотос'емку гістологічних препаратів проводили на мікроскопі MICROSAUSTRIA (Австрія) цифровою фотокамерою "Olympus" (Японія). Про ефективність гепатозахисної дії судили також по загибелі тварин контрольних груп і тварин, які отримували гепатопротектори.

Для порівняння ефективності гепатозахисної дії досліджуваних флавоноїдів, СЕ і карсила розраховували відсоток гепатопротекція по вивченим біохімічними показниками окремо і в цілому з урахуванням усіх показників за формулою: х 100%, де Н - коефіцієнт гепатопротекція, О - значення показника в дослідних групах, які отримували спільно СС1 4 і гепатопротектори, К - значення показника у тварин, які отримували тільки СС1 4 (патологічний контроль), N- значення показника у інтактних тварин (нормальний контроль). Чим більше величина цього критерію наближалася до 100%, тим ефективнішим вважалося гепатозащитное дію.

Інтенсивність ПОЛ вивчали за вмістом ТБК-активних продуктів у печінці і сироватці крові, дієнових кон'югатів (ДК) в печінці, інтенсивності спонтанного і Fe 2+ -аскорбатіндуцірованного ПОЛ в Пост'ядерний фракції печінки (ПФП). Оцінку антиоксидантної системи (АОС) проводили шляхом визначення активності в ПФП каталази, супероксиддисмутази (СОД), глутатіон-S-трансферази (Г-S-Т), глутатіонредуктази (ГР), глутатіонпероксидази (ГП): загальної, Se-залежної і Se- незалежною, НАДФ + -редуктази при використанні в якості субстратів малата (МДГ), глюкозо-6-фосфату (Г-6-ФДГ) і ізоцитрату (ІЦДГ), змістом глутатіону відновленого (GSH) в печінці, по загальній антиоксидантної активності (АОА) сироватки крові і резистентності еритроцитів до спонтанного гемолізу. Для кількісної оцінки дисбалансу в системі ПОЛ / АОС розраховували коефіцієнт окисного стресу як відношення твори показників ПОЛ до твору показників АОС, виражених у відносних одиницях до норми [Давидов Б.В., 1991], приймаючи, що при збереженні балансу в системі ПОЛ / АОС коефіцієнт (К) = 1.

Стан енергообміну вивчали за вмістом глюкози, глікогену, пірувату, лактату, АТФ в печінці та активності сукцинатдегідрогенази (СДГ), цитохром-с-оксидази (ЦТО) і Mg 2+ - АТФ-ази в мітохондріальної фракції печінки.Антитоксичну функцію печінки оцінювали, вимірюючи активності ферментів метаболічної трансформації ксенобіотиків - НАДН: K 3 [Fe (CN) 6] -редуктази, НАДФН: неотетразолій (НТ) - редуктази, N-деметилази, n-гідроксилази в микросомальной фракції печінки.

Вивчення антиоксидантної дії гесперидину, діосміну, флавіціна і кверцетину invitro проведено на моделі Fe 2+ -індуцірованного ПОЛ в липосомальной системі, отриманої на основі фосфатидилхоліну.

Вивчення впливу флавоноїдів на вміст радикалів NO в печінці і в організмі в цілому проводили методом ЕПР при використанні Fe 3+ ДЕТК 2 і Fe 3+ МГД 2 в якості пасток в нормі і після індукції ПОЛ CCl 4.

Вивчення впливу гесперидину і флавіціна на печінковий кровотік проведено в нормі при їх пероральному введенні в дозі 100 мг / кг і в умовах стимуляції ацетилхоліном (0,01 мг / кг) і блокади нітро-L-аргініном (10 мг / кг) синтезу ендогенного оксиду азоту при введенні аналізаторів і флавоноїдів (30 мг / кг) в ліву стегнову вену.

Ендотелійпротектівное дію гесперидину, діосміну, флавіціна і кверцетину вивчено в умовах моделювання дисфункції ендотелію в результаті екстирпації матки з придатками у щурів-самок, що викликає недостатність статевих гормонів. Досліджувані речовини вводили перорально протягом 4-хнедель після кастрації в дозі 100 мг / кг. Препаратом порівняння служив сулодексид з доведеною ендотеліопротектівной активністю в дозі 30 ЕВЛ / кг (одиниці вивільнення ліпопротеідліпази). Про вплив флавоноїдів на ендотеліальну дисфункцію судили по реакції судин на введення ацетилхоліну (0,01 мг / кг), L-аргініну (100 мг / кг), нітро - L-аргініну (10 мг / кг) і нітрогліцерину (0,007 мг / кг ), і визначали швидкість формування тромбу в судинах за часом тромбоутворення, викликаного аплікацією на стінку загальної сонної артерії 50% розчину хлориду заліза (III).

Вимірювання кровотоку здійснювалося на попередньо наркотізірованних етамінал-натрієм (40 мг / кг) щурах за допомогою ультразвукової доплерографії, датчика УЗОП-010-01 (робоча частота 25МГц) і комп'ютерною програмою ММ-Д-КMinimaxDopplerv.1.7 (Санкт-Петербург, Росія).

Визначення в'язкості крові, агрегації тромбоцитів, індукованої АДФ (5 мкМ) і індекс агрегації еритроцитів проводили з використанням реологічних методів із застосуванням реєструючої апаратури: аналізатор крові реологічний (АРП-01, Росія), двоканальний лазерний аналізатор агрегації (НПФ "Біола" LA-230 -2, Росія), лазерний коагулометр ( "мінілабі-701", Росія).

Антіфібротіческое дію СЕ досліджували на моделі хронічного ураження печінки СС1 4 (пероральне введення 50% масляного розчину СС1 4 9 разів, двічі в тиждень в дозі 2,0 мл / кг маси тіла) при його лікуванні та застосуванні в дозі 300 мг / кг в порівнянні з Карсилом ® в дозі 100 мг / кг по вимірюванню біохімічних маркерів сполучної тканини (ОП і ГАГ) і виявлення її елементів на гістологічних препаратах печінки через 7, 14 і 21 день лікування. Віддалені результати лікування були вивчені через 2 місяці після 21-денного курсу лікування.

Для оцінки желчеобразовательной функції печінки СЕ вводили в дозі 300 мг / кг 12 днів здоровим тваринам, а також на тлі гострого ураження печінки СС1 4: 50% масляний розчин СС1 4 вводили підшкірно в дозі 0,4 мл / 100 г маси тіла, 1 раз на добу, 4 дня. Визначали об'єм і склад (вміст жовчних кислот - ЖК і холестерину) виділеної жовчі з розрахунком холато-холестеринового коефіцієнта.

Статистичну обробку результатів проводили за допомогою параметричного критерію t Стьюдента з визначенням середньої арифметичної (М) і її стандартної помилки (m), непараметрического критерію Манна-Уїтні і коефіцієнта лінійної кореляції.

Основний зміст роботи

1. Порівняльне вивчення ефективності гепатозахисної дії флавоноїдів, СЕ з V. abbreviate (truncatula) і їх впливу на розвиток окисного стресу в умовах гострого ураження печінки тетрахлорметаном.

Тетрахлорметан є найбільш відомим гепатотоксинів, застосовуваним для моделювання захворювань печінки. Він піддається мікросомального окислення за участю цитохрому Р450 з утворенням електрофільних алкилірующих интермедиатов і вільних радикалів, здатних індукувати ПОЛ і модифікувати біомолекули в результаті ковалентного зв'язування з ними. Як встановлено в наших дослідженнях, в результаті введення СС1 4 спостерігався зрушення про-антиоксидантної рівноваги в бік посилення ПОЛ (підвищення вмісту ТБК-продуктів і ДК, інтенсивності Fe 2+ -аскорбатіндуцірованного ПОЛ ПФП) з виснаженням АОЗ (падіння активностей СОД, каталази, ДП , Г-S-Т, НАДФ + -редуктазою, змісту GSH, АОА сироватки крові), розвиток гіпоксичного стану з посиленням анаеробного гліколізу і порушенням аеробного продукції енергії на рівні мітохондрій (підвищення співвідношення лактат / піруват, зниження вмісту глюко и і глікогену в печінці, зниження активності СДГ, ЦТО і підвищення Мg 2+ -АТФази), пригнічення реакцій мікросомального окислення (зниження активностей N-деметилази, n-гідроксилази, НАДФН - НТ-редуктази). Це супроводжувалося розвитком важкого ураження печінки з проявами синдромів цитолізу (підвищення активності ФЛА 2, КФ, АлАТ, АсАТ і співвідношення АсАТ / АлАТ), холестазу (підвищення активності ЛФ, g-ГТП, вмісту загального білірубіну, особливо фракції прямого білірубіну), мезенхимального запалення (диспротеїнемія зі збільшенням глобулиновой фракції білків сироватки крові та підвищення тимолової проби), жирової дистрофії (збільшення кількості ТРГ при зниженні ФО в печінці) і печінково-клітинної недостатності (зменшення загального білка і особі але альбумінів в крові, зниження активності ХЕ, підвищення фракції прямого білірубіну в крові і вмісту сечовини). На гістоморфологічної картині також виявлялися зміни, характерні для ураження печінки ССl 4: жирова і білкова дистрофія, осередки некрозу, локалізовані переважно в центральній зоні печінкової часточки, ознаки запальної реакції (інфільтрація мононуклеарами), порушення кровообігу в мікросудинах (агрегація еритроцитів, стази крові), ураження ендотелію синусоїдів. На підставі отриманих даних можна говорити, що при введенні щурам тетрахлорметана в печінці розвивався гострий токсичний активний гепатит з осередкової жировою дистрофією гепатоцитів (гепатітогепатоз). Кількість загиблих тварин в цій групі склало 62,5%.

Лікувально-профілактичне застосування флавоноїдів, СЕ і карсила в ефективних дозах на тлі гострого CCl 4 -гепатітогепатоза в різному ступені впливало на відновлення біохімічних показників основних патологічних синдромів ураження печінки СС1 4, що відображає таблиця 1, в якій знаком "+" позначена повна нормалізація показника , віднесеного до того чи іншого синдрому, "±" - неповна нормалізація і "-" - відсутність ефекту (показник достовірно не відрізняється від такого у тварин з патологією), а також вказані середні відсотки гепатопроте кції по синдромам. Видно, що по відношенню до усунення синдрому цитолізу флавіцін, кверцетин і карсил проявили більш виражене дію, ніж гесперидин і диосмин. Але флавіцін, диосмин і гесперидин перевершували кверцетин і карсил по впливу на розвиток холестазу. Активацію мезенхіми кверцетин і карсил попереджали більш ефективно, ніж флавіцін, диосмин і гесперидин. Але флавіцін і диосмин перевищували дію кверцетину, гесперидину і карсила за впливом на розвиток синдрому печінково-клітинної недостатності. СЕ практично повністю нормалізував все вивчені показники.

Для кількісної порівняльної оцінки ефективності гепатозахисної дії флавоноїдів, СЕ і карсила в цілому були розраховані середні значення коефіцієнтів гепатопротекція з урахуванням всіх біохімічних показників. Виходячи з середнього відсотка гепатозащітним активності, найбільшою ефективністю в умовах СС1 4 -гепатітогепатоза мають флавіцін (92%) і сухий екстракт (95%), що достовірно перевищує дію карсила (61%) в 1,5-1, 6 рази і кверцетину ( 77%) в 1, 2 рази, і підтверджується відсотком тих, що вижили тварин, що склав для флавіціна, діосміну і сухого екстракту 100%, кверцетину - 92%, гесперидину і карсила - 83%.

Таблиця 1 Відновлення показників основних патологічних синдромів при лікувально-профілактичному введенні біофлавоноїдів, СЕ і карсила в умовах гострого СС1 4 -гепатітогепатоза у щурів

синдроми

речовини

цитоліз

(АлАТ,

АсАТ,

КФ,

ФЛА 2)

холестаз

(ЛФ,

g-ГТП,

ПБ)

Мезенхі-

мальное

запалення

(Глобуліни,

альбуміни

/ Глобуліни,

ТП)

Печінково-клітинна

недостатність

синтетичні-чна

функція

(Заг. Білок,

альбумі-

ни, ХЕ)

обезвре-

жива

функція

(сечо

вина,

НПБ)

метаболічна

функція

(Глюкоза сив.,

глікоген печ.,

ТРГ сив.,

ТРГ печ., ФО печ)

гесперидин,

100мг / кг

± - ± + + - + ± ± - ± ± ± - + - ± ± ± +
% відновлення 64,3 65,6 46 61 56,8 71

діосмін,

100 мг / кг

± - + + + + + + + ± + + ± + + ± + ± ± +
% відновлення 82,9 91,2 73,8 78,6 105,3 79
Флавіцін, 100 мг / кг + + + + + + +

+ + ±

+ + + + + + + ± ± +
% відновлення 89,9 98,5 75,7 83,4 107,5 101,1
Кверцетин, 100 мг / кг + + + + - ± ± + + + + + ± + - + + ± ± ±
% відновлення 95,3 45,4 93,1 77,7 67,6 77,2

сухий

екстракт,

300 мг / кг

+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
% відновлення 93,5 99,6 96,7 88,3 104,6 99,2

карсил,

100 мг / кг

+ + + + ± - ± + + + + + ± + -

- ± ± +

% відновлення 93,6 48,4 96,7 71 65,1 36,3

Прімеченіе

"+" - повна нормалізація показника;

± "- неповна нормалізація;

"-" - відсутність ефекту

Гистоморфологические дослідження також свідчать про більш високому захисному дії флавіціна і СЕ, при застосуванні яких відзначалися найменші патогистологические зміни в печінці щурів.

У гістологічної картині печінки щурів, які отримували карсил, були ознаки більш вираженого запалення, порушення мікроциркуляції і жирового переродження, а також зазначалося наявність східчастих некрозів і порушення цитоархітектоніки печінкових балок. При аналізі впливу досліджуваних речовин, що володіють різним ступенем гепатозахисної дії, на розвиток окисного стресу при гострому СС1 4


показники ПОЛ

показники АОС
Примітка: 100% - контроль - CCl 4 -гепатітогепатоз
- достовірно по відношенню до інтактним значенням
- достовірно по відношенню до патологічного контролю

Малюнок 1 - Вплив біофлавоноїдів, СЕ і карсила на систему ПОЛ - АОС при гострому СС1 4 -гепатітогепатозе у крисгепатітогепатозе, були встановлені різні варіанти зміни прооксидантно і антиоксидантної складової даного процесу (рис.1, таблиця 2).

Так, флавіцін і СЕ нормалізували все вивчені показники ПОЛ і практично всі показники неферментативного і ферментативного ланок АОС. Кверцетин так само,

як і флавіцін і СЕ, повністю стримував інтенсифікацію ПОЛ, але при цьому не впливав на активність ряду найважливіших антиоксидантних ферментів (СОД, каталаза, Г-S-Т). Навпаки, диосмин, значно ефективніше, ніж кверцетин, нормалізував ферментативне ланка АОС (на рівні контролю залишалася тільки активність Г-6-ФДГ), але в меншому ступені знижував прооксидантний потенціал. Гесперидин і карсил в повному обсязі нормалізували як показники ПОЛ, так і системи АОЗ, особливо її ферментативного ланки: у щурів, які отримували гесперидин і карсил на рівні контролю перебували активності ферментів як 1-ої лінії захисту (Г-S-Т і СОД, ГП, Г-S-Т відповідно), так і ферментів, що поставляють відновлювальні еквіваленти для "роботи" ДП і Г-S-Т (Г-6-ФДГ, ІЦДГ і МДГ відповідно), так що при цьому і загальна НАДФ + -редуктазная активність повністю не відновлювалася, на відміну від застосування інших гепатопротекторів (рис.1).

Оцінка відновлення про-антиоксидантної рівноваги за допомогою розрахунку коефіцієнта окисного стресу (таблиця 2) показала, що його значення стали майже рівними одиниці в результаті застосування флавіціна і СЕ. Найбільш високі коефіцієнти мали тварини, які одержували гесперидин (17,4) і карсил (10,7). При цьому виявлено тісний кореляція між коефіцієнтом окисного стресу і відсотком гепатопротекторної активності (r = - 0,85 ± 0,26, Р <0,05). Можна зробити висновок, що вираженість гепатозахисної дії істотно пов'язана зі ступенем відновлення про-антиоксидантної рівноваги: ​​чим більшою мірою спостерігається відновлення балансу в системі ПОЛ-АОС, тим вище ступінь захисної дії. Звертає на себе увагу, що ПРООКСИДАНТНО складову окисного стресу кверцетин знижував більшою мірою (до 0,54), ніж флавіцін (0,92) і СЕ (1,07) але коефіцієнт окисного стресу при його введенні був майже в 2 рази вище ( 3,4) через недостатнє відновлення АОС. Це свідчать на користь того положення, що більше значення для захисту печінки має не просто зниження і придушення ПОЛ, а відновлення тієї

Таблиця 2 - Значення коефіцієнта окисного стресу і відсотка гепатопротекція у тварин з CCl 4 -гепатітогепатозом і при введенні біофлавоноїдів, СЕ з V. truncatula і карсила

Групи тварин

прооксіданти

(ТБК - акт. Продукти печ. X ДК печ),

в отн. од. до норми

антиоксиданти

(СОД x каталаза x ДП x Г-S-Т печ),

в отн. од. до норми

К,

про- / антіоксід.

%

гепато-протекції

інтактні 1 1 1
СС1 4 -гепатітогепатоз 34,8 0,091 382

Введення гесперидину,

100 мг / кг

5,38 0,31 17,4 65

Введення діосміна,

100 мг / кг

2,98 0,48 6,2 84

Введення флавіціна,

100 мг / кг

0,92 0,78 1,2 92

Введення кверцетину,

100 мг / кг

0,54 0,16 3,4 77

Введення СЕ,

100 мг / кг

1,07 0,56 1,9 95

Введення карсила,

100 мг / кг

1,75 0,16 10,7 61

Регуляції інтенсивності вільнорадикального окислення і підтримку того рівноваги в системі ПОЛ / АОС, яке існують в нормі. Отримані результати демонструють істотну роль не тільки власне антиоксидантної дії флавоноїдів, а й посилення ендогенних механізмів АОЗ для підтримки і відновлення про-антиоксидантної рівноваги в умовах окисного стресу.

Досліджувані нами флавоноїди і СЕ при їх лікувально-профілактичному застосуванні в умовах гострого CCl 4 -гепатітогепатоза, так само, як і карсил, гальмували анаеробні процеси і покращували аеробний шлях виробництва енергії. При застосуванні гесперидину, діосміну, флавіціна, кверцетину і СЕ вірогідно зменшувався співвідношення лактат / піруват на 37%, 66%, 87%, 79% і 85% відповідно, підвищувалися активності мітохондріальних ферментів: СДГ на 86%, 113%, 239%, 119% і 119%; ЦСО - на 131%, 379%, 402% і 228% відповідно і зміст АТФ в печінці на 41%, 63%, 67%, 112% і 64% відповідно. Видно, що в найменшій мірі знижував процеси анаеробіозу і підвищував вміст АТФ в печінці гесперидин. Карсил також поступався, за деякими показниками, вивченим флавоноидам і СЕ: знижував співвідношення лактат / піруват на 78%, збільшував активність ЦТО і зміст АТФ на 191% і 22% відповідно і не впливав на активність СДГ.

Подоланню окисного стресу сприяло також і те, що досліджувані речовини відновлювали роботу микросомальной монооксигеназной і редуктазної електрон-транспортних ланцюгів, що дозволяє нормалізувати як продукцію вільних радикалів, так і детоксикаційну функцію печінки. Більш повне відновлення активностей N-деметилази і n-гідроксилази при застосуванні флавіціна і СЕ, можливо, пояснюється тим, що при цьому в найбільшій мірі забезпечується захист системи цитохромів Р450 від деградації.

Таким чином, отримані результати демонструють, що вираженість гепатозахисної дії при гострому ураженні печінки СС1 4 тісно пов'язана зі здатністю відновлювати про- / антиоксидантну рівновагу за рахунок підвищення ефективності ендогенної системи АОЗ і пов'язаних з нею процесів енергозабезпечення і детоксикації, що є істотним в механізмі гепатопротекторної активності флавоноїдних сполук і СЕ. Флавіцін і СЕ в умовах СС1 4 -гепатітогепатоза нормалізують або покращують практично одні і ті ж показники, тобто їх дія подібна як в якісному, так і кількісному відношенні. У відношення показників білкового обміну і активації мезенхіми СЕ кілька перевищує дію флавіціна, що можливо пов'язано з наявністю в його складі додаткових компонентів, наприклад, цілого ряду амінокислот, в. т. ч. незамінних.

2. Порівняльне вивчення ефективності гепатозахисної дії флавоноїдів, СЕ з V. abbreviate (truncatula) і їх впливу на розвиток окисного стресу при гострому алкогольному ураженні печінки

Як відомо, алкогольне ураження печінки в великій мірі обумовлено окислювальному деградацією етанолу, що протікає в цьому органі [Буеверов А.О., 2002 Калінін А.В., 2005, FrenchS. W., 2000., LieberC. S., 2005] за участю алкогольдегідрогенази і мікросомальної монооксигеназної системи. Надмірне надходження етанолу призводить до накопичення ацетальдегіду і підвищенню утворення вільних радикалів в мікросомальних е --транспортних ланцюгах, що призводить до посилення ПОЛ, виснаження антиоксидантних ресурсів і пошкодження біомембран вільними радикалами і продуктами ПОЛ, що і визначається поняттям окисного стресу.

Було встановлено, що в результаті 7-денний алкоголізації спостерігалося підвищення N-деметілазной і НАДФН-НТ-редуктазної активностей на 145% і 57%, ймовірно, внаслідок індукції ізоформи цитохрому Р450 2Е I, яка бере участь в окисленні етанолу [Мальцев О.М. і ін., 2001], що відбувається в результаті систематичного зловживання алкоголем. Одночасно було виявлено підвищення інтенсивності індукованого ПОЛ ПФП на 128% і вмісту ТБК-активних продуктів у сироватці крові на 114%, хоча в печінці вміст ТБК-активних продуктів і ДК достовірно не змінилося. Це супроводжувалося падінням ефективності АОЗ на різних рівнях - зниженням активності СОД на 41%, каталази на 50%, загальної активності ГП на 51%, Г-S-Т на 38%, утримання GSH на 48%, а також відбулося зниження активності основних ферментів , що поставляють відновлювальні еквіваленти для глутатіонредуктазной реакції: МДГ - на 43%, Г-6-ФДГ - на 75% і ІЦДГ - на 57%. При цьому коефіцієнт окисного стресу збільшився до 62,5, що вказувало на розвиток синдрому пероксидації. Поряд з цим, як і при гострому CCl 4 -гепатітогепатозе, відбувалося формування тканинної гіпоксії, про що свідчило більш ніж п'ятикратне збільшення співвідношення лактат / піруват, зниження вмісту в печінці глюкози і глікогену, що є результатом високої інтенсивності анаеробного гліколізу і глікогенолізу, а також падіння активності ферментів мітохондрій (СДГ і ЦТО) та інтенсивності процесу окисного фосфорилювання (зростання Mg 2+ -АТФазной активності) і, як наслідок, зменшення вмісту АТФ (-59%).

Виявлені зміни біохімічних показників в результаті 7-денного введення 33% етанолу щурам-самкам свідчили про розвиток ураження печінки з проявом ознак тих же основних патофізіологічних синдромів, що і при СС1 4 -гепатітогепатозе: цитолізу, холестазу, мезенхімального запалення (з залученням імунного компонента) і печінкової недостатності. Дані зміни були виражені в меншому ступені, ніж при впливі СС1 4, і багато в чому збігалися з тими, які спостерігаються у хворих з різними формами алкогольної хвороби печінки.

При дослідженні гістологічних препаратів також виявлялися певні морфологічні ознаки, характерні для алкогольного ураження печінки: перівенулярного поразку гепатоцитів з балонної дистрофією і некрозом з превалюванням ознак "еозинофільної дегенерації", хоча тілець Меллорі, явищ жирової дистрофії, а також перицелюлярний фіброзу виявлено не було, що свідчило про розвиток гострого токсичного ураження печінки помірного ступеня тяжкості.

Досліджувані флавоноїди і СЕ при алкогольному ураженні печінки також проявили гепатозхисні властивості. Дані таблиці 3 свідчать що, гесперидин поступався всім іншим речовинам, а флавіцін і СЕ, навпаки, перевершували їх за впливом на відновлення практично всіх показників синдромів цитолізу, холестазу, мезенхімального запалення, білково-синтетичну і метаболічну функції печінки.

Як і при СС1 4 -гепатітогепатозе, кверцетин і карсил перевищували дію діосміна на цитолиз і мезенхімального запалення і додатково на білково-синтетичну функцію печінки, але диосмин був більш ефективним за впливом на холестаз і метаболічну функцію печінки (вуглеводний і ліпідний обміни), ніж кверцетин і карсил, що чітко видно по середнім відсоткам відновлення показників відповідних синдромів.

За коефіцієнтом гепатопротекція з урахуванням всіх біохімічних показників досліджувані речовини за паливною ефективністю гепатопротекторного дії при гострому алкогольному ураженні печінки можна розташувати в наступній послідовності: сухий екстракт (97%), флавіцін (96%), диосмин (78%), кверцетин (70%), карсил (69%) і гесперидин (38%). Флавіцін і СЕ мають достовірно більш високі коефіцієнти гепатопротекція, ніж кверцетин (70%) і карсил (69%) в 1,4 рази. Відсоток тих, хто вижив тварин при застосуванні карсила в ході 7-денний алкоголізації був нижче (66,7%), ніж при застосуванні діосміна (83,3%), флавіціна (100%) сухого екстракту (100%).

Таблиця 3 Відновлення показників основних патологічних синдромів при лікувально-профілактичному введенні біофлавоноїдів, сухого екстракту і карсила в умовах гострого алкогольного ураження печінки у щурів

синдром -

ми

речовини

цитоліз

(АлАТ,

АсАТ,

КФ,

ФЛА 2)

холестаз

(ЛФ,

g-ГТП,

ПБ)

мезенхімального

запалення

(Глобуліни,

альбуміни

/ Глобуліни,

ТП)

Печінково-клітинна недостатність

білково-синтетична

функція

(Заг.білок,

альбуміни, ХЕ, сечовина)

метаболічна функція

(Глюкоза сив.,

глікоген печ.,

ТРГ сив.,

ТРГ печ., ФО печ)

гесперидин,

100мг / кг

+ - + + - ± ± - ± - ± ± - - + -
% відновлення 63,4 26,1 16,3 26,5 35,7

діосмін,

100 мг / кг

+ + + + - + + + ± ± + ± + ± ++ + + +
% відновлення 93,4 84,4 54,9 54,5 84,3

Флавіцін,

100 мг / кг

+ + + + + + +

+ ± +

+ + + ± + + + + +
% відновлення 115,6 101,9 82,9 65,6 107,6

кверцетин,

100 мг / кг

+ + + + - ± + + - ± + + + ± + ± + + -
% відновлення 100,8 55,2 67,2 59 75,3

сухий

екстракт,

300 мг / кг

+ + + + + + + + + + + + + + + + + + +
% відновлення 96,3 94,8 105,1 94,6 95,0

карсил,

100 мг / кг

+ + + + + - + + ± ± + + ± +

- + + -

% відновлення 108,7 65,3 84,1 56,3 29,0
Прімеченіе "+" - повна нормалізація показника; "±" - неповна нормалізація; "-" - відсутність ефекту

Як і при CCl 4 -гепатітогепатозе, при алкогольному ураженні печінки, досліджувані флавоноїди, СЕ і карсил сприяли нормалізації інтенсивності ПОЛ і активності АОС (рис.2). При цьому у всіх випадках спостерігалася повна нормалізація вмісту ТБК-активних продуктів у сироватці крові та

показники ПОЛ
показники АОС
Примітка: 100% - контроль - алкогольне ураження печінки
- достовірно по відношенню до інтактним значенням
- достовірно по відношенню до контролю
Позначення як на рис.1

Малюнок 2 - Вплив біофлавоноїдів, СЕ і карсила на систему ПОЛ - АОС при гострому алкогольному ураженні у щурів зменшення накопичення МДА при Fe 2+ аскорбатіндуцірованном ПОЛ ПФП, за винятком тварин, які отримували гесперидин (накопичення залишалося вище норми на 62%).

Відносно відновлення ферментативної АОЗ можна відзначити значну схожість в дії діосміну, флавіціна і СЕ. При застосуванні флавіціна і СЕ при алкогольної інтоксикації на рівні нормальних значень перебували практично всі показники АОС: СОД, каталаза, ДП заг., Г-S-Т, GSH, загальна НАДФН + -редуктазная активність (малат + глюкозо-6-фосфат + ізоцитрат ) з вираженим ступенем підйому Г-6-ФДГ. Лише активність ІЦДГ при застосування СЕ не досягала інтактних значень, але при цьому активність Г-S-Т і ГР були достовірно вище норми і контролю відповідно. Дія діосміна характеризувалося дещо меншою ефективністю: з перерахованих показників не повністю відновилися загальна НАДФ + -редуктазная активність (в основному через ІЦДГ) і активність ГП. Те ж саме можна відзначити і в дії кверцетину, але, крім цього, в повному обсязі відновлювалася активність каталази і залишалися на низькому рівні активності Г-S-Т, ГР і ІЦДГ. Під впливом гесперидину і карсила спостерігалася повна нормалізація СОД і каталази, практично в рівній мірі підвищувався вміст GSH. При дії гесперидину відзначалося деяке збільшення активності ГП, але при введенні карсила активність даного ферменту не змінилася в порівнянні з тваринами, які отримували тільки етанол. У той же час, гесперидин не вплинув на активність Г-S-Т, а карсил нормалізував її. Відносно НАДФ + -редуктазних активностей при застосуванні гесперидину відзначалося збільшення до норми МДГ при незміненій активності ІЦДГ. У той же час карсил посилював активність ІЦДГ, не впливаючи на МДГ і Г-6ФДГ. В силу цього і загальна НАДФ + -редуктазная активність при їх введенні відновлювалася не в повній мірі.

Коефіцієнт окисного стресу в результаті застосування флавоноїдів, СЕ і карсила значно зменшився в порівнянні з тваринами, які отримували тільки алкоголь (таблиця 4). При введенні флавіціна і СЕ він був навіть нижче 1. Найбільш високі показники коефіцієнта окисного стресу, як і в дослідах з ураженням печінки СС1 4, мали тварини, які одержували гесперидин (3,26) і карсил (3,2), для яких встановлена і менша ефективність гепатозахисної дії при алкогольному ураженні печінки.

Таблиця 4 - Значення коефіцієнта окисного стресу і відсотка гепатопротекція у тварин з алкогольною інтоксикацією і при введенні біофлавоноїдів, СЕ і карсила

Групи тварин

прооксіданти

(ТБК - акт. Продукти сив. X ТБК - акт. Продукти печ. X

ДК печ. x ПОЛ ПФП),

в отн. од. до норми

антиоксиданти

(СОД x каталаза x ДП x

Г-S-Т печ),

в отн. од. до норми

К,

про- / антіоксід.

%

гепато-протекції

інтактні 1 1 1
алкогольна інтоксикація 5,6 0,0896 62,5

Введення гесперидину,

100 мг / кг

1,18 0,36 3,26 38

Введення діосміна,

100 мг / кг

1,34 0,60 2,23 78

Введення флавіціна,

100 мг / кг

0,79 1,13 0,70 96

Введення кверцетину,

100 мг / кг

0,58 0,22 2,63 70

Введення СЕ,

100 мг / кг

0,91 1,44 0,63 97

Введення карсила,

100 мг / кг

1,28 0,40 3, 20 69

Таким чином, висновок про важливість підтримки про-антиоксидантної рівноваги та значущості посилення власних механізмів АОЗ при дії факторів, знайшов своє підтвердження і в дослідах з алкогольним ураженням печінки. Кореляція між коефіцієнтом окисного стресу і відсотком гепатопротекція склала - 0,81 ± 0,29, Р <0,05, доводячи наявність досить істотного зв'язку між ефективністю гепатозахисної дії і ступенем відновлення про-антиоксидантної рівноваги.

Інтенсивність анаеробного шляху окислення вуглеводів при алкогольному ураженні печінки на тлі застосування флавоноїдів, СЕ і карсила була значно знижена, а також спостерігалися відновлювальні процеси в мітохондріях печінки і підвищувався вміст АТФ. Більш виражене відновлення показників енергетичного обміну спостерігалося у тварин під впливом флавіціна і СЕ, що застосовуються на тлі 7-денний алкоголізації: співвідношення лактат / піруват знизилося на 88% і 91%, зміст АТФ збільшилася на 127% і 106%, активності СДГ - на 135 % і 137% і ЦСО - на 63% і 55% відповідно по відношенню до контролю, що достовірно не відрізнялося від відповідних значень у інтактних тварин.

В умовах алкогольної інтоксикації було виявлено индуцирующее вплив на цитохром-Р450-залежні реакції: гесперидину і карсила - на N-деметілазную (+ 22% і + 97%) і n-гідроксилазних активності (+ 289% і + 420%); кверцетину - на N-деметілазную активність (+ 131%); СЕ - на n-гідроксилазних активність (+ 519%). При застосуванні флавіціна і діосміна все ті зміни в даних реакціях мікросомального окислення, які були викликані введенням етанолу, повністю усувалися: знижувалася активність N-деметилази (-51% і - 42%) і підвищувалася активність n-гідроксилази (+ 153% і +150 %) до рівня норми (вказані відсотки зміни в порівнянні з контролем, які отримували тільки етанол).

Таким чином, найбільша ефективність гепатозахисної дії при алкогольному ураженні печінки, яка перевищує таку карсила, виявлена ​​у флавіціна і СЕ. Порівняльний аналіз показує, що чим більшою мірою речовини відновлюють про-антиоксидантну рівновагу і усувають метаболічні зрушення, що розвиваються внаслідок посилення окисного метаболізму алкоголю, тим більш вираженим гепатозащітним дією вони володіють. Важливим в захисті печінки від шкідливого впливу в результаті оксидативного стресу є не тільки власний антиоксидантний ефект з'єднань, але і здатність підтримувати високу активність ендогенної антиоксидантної системи, порушення функціонування якої, призводить до зриву компенсації і розвитку синдрому пероксидації.

3. Вивчення антиоксидантної дії флавоноїдів, сухого екстракту з V. abbreviate (truncatula) і карсила in vitro і їх впливу на системи АОЗ, енергетичного обміну та детоксикації in vivo в умовах норми

Дослідження, проведені invitro і на здорових тварин після курсового введення флавоноїдів, СЕ і карсила в ефективних гепатопротекторних дозах, дозволили встановити наступне: I. Гесперидин, диосмин і флавіцін пригнічують Fe 2+ -індуцірованное ПОЛ в системі ліпосом і є менш сильними антиоксидантами прямої дії, ніж кверцетин (IC 50 одно відповідно 7,0 × 10 -2 М, 4,9 × 10 -2 М, 4,9 × 10 -3 М і 6,3 × 10 -5 М). II. В результаті курсового введення досліджуваних флавоноїдів в організмі тварин реєструється:

1) зниження ТБК-активних продуктів крові; зниження активності антирадикальних і антиперекисного ферментів (СОД і ГП);

2) посилення глутатіонової системи (збільшення вмісту GSH, активності ГР і НАДФ-редуктаз в печінці);

3) зниження співвідношення лактат / піруват і вмісту глюкози в печінці;

4) підвищення активності Mg 2+ АТФази в мітохондріях печінки без зниження АТФ в цьому органі;

5) підвищення активності ферментів мікросомального окислення.

Багато з виявлених ефектів флавоноїдів виникають, на наш погляд, з природи хімічних властивостей цих сполук, а саме здатності брати участь в оборотних окислювально-відновних перетвореннях, проявляючи як водороддонорние, так і водородакцепторние властивості. В силу цього біофлавоноїди можуть формувати самостійні редокс-системи типу фенол-семіхінонов-хинон, що дає їм можливість знижувати кількість і / або утворення вільних радикалів і інтенсивність ПОЛ і, ймовірно, дозволяє створювати в клітці резерв окислених нікотинамідних коферментів (NAD +; NADР + ), які можуть забезпечити посилення метаболічних реакцій і підтримання пулу відновленого GSH, що підвищує потужність ендогенної АОС. Формування самостійних редокс-систем та посилення енергопродукції в ході гліколізу може визначати антигіпоксичну дію флавоноїдів, що допомагає усунути посилює вплив гіпоксії і енергодефіциту при розвитку окисного стресу.

Таким чином, виходячи з отриманих результатів, можна зробити висновок, що механізм захисної дії біофлавоноїдів проти окисного стресу, що розвивається при токсичних ураженнях печінки, є багатоплановим і різноманітним.Це і пряме антиоксидантну дію в силу антирадикальних і хелатирующих властивостей даних сполук. Це і непряма захист шляхом активування ендогенної системи АОЗ і детоксикації, а також підвищення неспецифічної стійкості шляхом поліпшення енергопродукції, захисту мітохондрій і SH-груп білків від окисного ушкодження. Таке опосередковане підвищення активності природних захисних систем може мати важливе значення в прискоренні адаптації організму до дії факторів середовища. Слід підкреслити, що більш значущим є активування ендогенної захисної системи і оптимізація її роботи, ніж власна АОА сполук, що може досягатися, згідно з останніми даними літератури [Меньщикова Е.Б. і ін., 2006], через активування флавоноїдами антиоксидант-респонсівного елемента (ARE), присутнього в промоторах багатьох індуцибельних генів у відповідь на окисний і хімічний стрес.

4. Вивчення впливу флавоноїдів на ендотеліальну дисфункцію, продукцію NO, органний кровотік і гемореологічні властивості крові

Добре відомо позитивний вплив біофлавоноїдів на систему кровообігу, недостатність якої здатна посилювати метаболічні порушення, що вимагає корекції гемодинамічних і гемореологических розладів при різних патологіях внутрішніх органів. Можливо, багато судинних ефекти флавоноїдів пов'язані з їх впливом на ендотелійзавісімих процеси [BenitoS., 2002 KowalczykE., 2002 LorenzM., 2004, LeikertJ. F., 2002 WallerathTh., 2005].

Наші дослідження на тваринах з моделюванням ендотеліальної дисфункції підтверджують цю точку зору, демонструючи ендотелій протективного дію гесперидину, діосміну, флавіціна і кверцетину.

При тестуванні ендотеліальної функції шляхом реєстрації мозкового кровотоку у щурів-самок з недостатністю статевих гормонів, які отримували досліджувані флавоноїди протягом місяця в дозі 100 мг / кг, встановлено поліпшення реакції судин на ацетилхолін (стимулятор синтезу ендогенного NO), а також більш виражене зниження кровотоку в відповідь на введення блокатора NO-синтази - нітро-L-аргініну в порівнянні з експериментальною патологією. Крім цього, у тварин, які отримували флавоноїди, спостерігалося збільшення в порівнянні з контролем ступеня приросту мозкового кровотоку (гесперидин> кверцетин> диосмин> флавіцін) у відповідь на багаторазове введення ацетилхоліну. Це дозволяє зробити висновок про збільшення продукції NO ендотеліальними клітинами під впливом флавоноїдів. Ендотелій протективное дію флавоноїдів проявлялося і в тому, що вони збільшували час тромбоутворення, яке значно знижувався у тварин з дисфункцією ендотелію, розташовуючись по ефективності своєї дії в наступному порядку кверцетин> флавіцін> диосмин> гесперидин.

Крім того, флавоноїди на тлі ендотеліальної дисфункції надавали корреггірующее дію на в'язкість крові, зменшували індекс агрегації еритроцитів і тромбоцитів і збільшували індекс дезагрегації тромбоцитів, усували порушення механічних властивостей еритроцитів (таблиця 5).

Здатність флавоноїдів позитивно впливати на функціонування судинного ендотелію має значення для нормалізації органного кровотоку і мікроциркуляції. У дослідах на наркотізірованних щурах-самцях продемонстровано поліпшення печінкового кровотоку при введенні гесперидину і флавіціна, а також показано, що дана реакція обумовлена ​​їх впливом на ендотелій з активацією вироблення NO.

Таблиця 5 - Вплив флавоноїдів на агрегацію тромбоцитів крові кастрованих щурів

Групи тварин Індекс агрегації тромбоцитів Індекс дезагрегации тромбоцитів Максимальний нахил
інтактні тварини 4,8 ± 1,52 63,2 ± 6,09 18,9 ± 1,14
Тварини з ендотеліальної дисфункцією

15,6 ± 3,51

+ 53%

54,4 ± 6,99

14%

53,0 ± 0,76

+ 180%

гесперидин

10,4 ± 1,63 *

33%

60,0 ± 7,00

+ 10%

35,5 ± 1,14 *

33%

Флавіцін

10,5 ± 0,70 *

33%

64,5 ± 7,24

+ 19%

42,6 ± 4,91 *

20%

кверцетин

12,8 ± 0,52 *

18%

69,4 ± 3,13 *

+ 28%

38,3 ± 2,95 *

28%

діосмін

13,6 ± 0,60

13%

61,0 ± 8,22

+ 12%

44,9 ± 4,82 *

15%

сулодексид

9,8 ± 4,9 *

37%

79,7 ± 7,31 *

+ 47%

25,6 ± 0,76 *

52%

Примітки

1 - дані достовірні по відношенню до інтактним тваринам (Р <0,05), критерій Манна-Уїтні;

2 * - дані достовірні по відношенню до тварин з ендотеліальної дисфункцією (Р <0,05), критерій Манна-Уїтні

Підвищення змісту NO виявлено і методом ЕПР в організмі тварин, які отримували гесперидин (100 мг / кг, 5 днів). Про підвищення рівня NO свідчило збільшення компонентів сигналу парамагнітного аддукта NO-Fe 2+ -МГД 2 в спектрах ЕПР сечі тварин після застосування гесперидину в порівнянні з такими у інтактних щурів (рис.3).

Малюнок 3 - Вплив введення гесперидину на освіту аддуктов NO в організмі здорових тварин

В результаті ін'єкції CCl 4 в печінці спостерігалося значне зростання інтенсивності генерації радикалів NO, реєструється методом ЕПР з використанням Fe3 + - ДЕТК 2 в якості пастки NO, найімовірніше, внаслідок активації iNOS. Посилення експресії iNOS під дією СС1 4, можливо, пов'язано з тим, що Тетрахлорметан здатний індукувати ПОЛ і пов'язану з ним продукцію супероксидного аніон-радикала (О 2 × -), який є активатором синтезу NO індуцібельной NO-синтетазної системою [Коваленко О.А. . і ін., 1996, Реутов Н.П., 2000., Данилович Ю.В., 2001., OkamotoT., 2000]. Підвищення вмісту в печінці NO під дією СС1 4 може вносити додатковий внесок в розвиток окисного стресу і в прояв гепатотоксичної дії СС1 4, оскільки NO може функціонувати і як інгібітор токсичної дії О2 × -, і як джерело освіти більш небезпечних NOO ×. радикалів [ME deVera, 1995].

Попереднє введення флавоноїдів кверцетину і гесперидину перед ін'єкцією СС1 4 значно знизило амплітуди 3-х компонентів сигналу аддукта NO-Fe 2+ -ДЕТК 2 в зразках печінки.

Примітки 1 Інтактні тварини; 2 Введення CCl 4; 3 Кверцетин + CCl 4; 4 Гесперидин + CCl 4

Малюнок 4 - Спектри ЕПР зразків печінки щурів з різних експериментальних груп при температурі рідкого азоту

У тварин, яким вводили такі флавоноїдні з'єднання, як диосмин і флавіцін на тлі стимуляції продукції оксиду азоту СС1 4, виявити їх вплив на процес утворення NO в печінці щурів не вдалося. В ЕПР спектрах зразків печінки цих тварин домінував інтенсивний синглентно сигнал, не пов'язаний з утворенням парамагнітних аддуктов NO-Fe 2+ -ДЕТК 2. Зниження вмісту NO в організмі тварин, яким вводили флавіцін і диосмин, вдалося встановити при використанні в якості пастки Fe 3+ -МГД 2 з придушення відповідних компонентів сигналу аддукта NO-Fe 2+ -МГД 2 в спектрах ЕПР сечі тварин, які отримували на фоні CCl 4 флавіцін і диосмин, в порівнянні з контрольними тваринами (введення тільки CCl 4).

Придушення продукції NO флавоноїдних сполук, швидше за все, пов'язано з їх антиоксидантну активність і здатність гальмувати утворення вільних радикалів. Крім того, показано, що флавоноїдні з'єднання зменшують експресію iNOS в макрофагах, індуковану ліпополісахаридами [ChenY. etal., 2000., CheonB. S. etal., 2000., ChiY. etal., 2001] через гальмування зв'язування фактора транскрипції NF-kB, який контролює індукцію експресії генів iNOS.

Таким чином, ендотелій протективное дію досліджуваних флавоноїдів, поліпшення гемореологічних властивостей крові, підвищення продукції NO судинним ендотелієм і збільшення печінкового кровотоку, а також зниження гіперпродукції NO в печінці індуцібельной NO-синтази можуть бути додатковими факторами захисту печінки від ушкодження.

5. Вивчення гепатозахисної дії СЕ з V. abbreviate (truncatula) при хронічній експериментальної патології печінки

Оскільки в клінічній практиці препарати частіше використовуються з лікувальною метою на тлі вже сформувалася патології, необхідно продемонструвати терапевтичну ефективність нового засобу, а також важливо оцінити його вплив на проліферацію сполучної тканини, що спостерігається при хронічних захворюваннях печінки.

Лікувальна дія СЕ при хронічній алкоголізації в дозі 300 мг / кг в порівнянні з Карсилом ® в дозі 100 мг / кг вивчали через 7, 14 і 21 день їх застосування після 60-денного введення 40% етанолу і потім спільно з ним.

Було встановлено, що в результаті 60-денного введення алкоголю спостерігалося падіння ефективності системи АОЗ і порушення про- / антиоксидантної рівноваги з переважанням прооксидантно складової, тобто розвиток окисного стресу. При цьому відзначалося зростання вмісту ТБК-активних продуктів у сироватці крові на 135%, в печінці на 175% і підвищення кількості ДК в печінці на 332%. Одночасно реєструвалося зниження в печінці активності основних антиоксидантних ферментів: СОД - на 55%, каталази - на 45%, ДП - на 47%, ГР - на 41% і Г-S-ТР - на 48%, а також Г-6 ФДГ - на 88%, що бере участь в забезпеченні глутатіонредуктазной реакції відновними еквівалентами. Крім цього, зазначалося посилення анаеробіозу (підвищувався співвідношення лактат / піруват на 100%) і зниження вмісту АТФ (-52%), тобто розвивався енергодефіцит, що, як відомо, сприяє додаткової стимуляції вільно-радикального окислення і може викликати незворотні зміни і загибель клітини.

У щурів після 60-денної алкоголізації реєструвалося достовірне підвищення в сироватці крові активності АлАТ (+ 134%) і ЛФ (+ 72%), вмісту загального білірубіну (+ 53%), показника ТП - на 104%, збільшувався вміст ТРГ в сироватці крові (+ 132%) і в печінці (+ 70%), знижувалася активність ХЕ в сироватці крові на 48%. Ці зміни свідчили про розвиток цитолізу і холестазу гепатоцитів, жирової дистрофії, зниження білково-синтетичної функції печінки, розвитку запалення в цьому органі і активації мезенхіми. Такі показники, як вміст ГАГ в сироватці крові і ОП в печінці, збільшувалися на 15% і 35% відповідно, але достовірних відмінностей від норми виявлено не було.

При подальшому прийомі алкоголю виявлено активація адаптаційно-пристосувальних механізмів, спрямованих на захист проти шкідливого чинника (рис.5). Це проявилося, насамперед, в тому, що підвищувалися активності ГП та Г-S-ТР, знижувався вміст GSH в печінці і збільшувалися активності Г-6-ФД і ГР.

При лікуванні та застосуванні СЕ спостерігалася більш виражена активація ДП і Г-S-ТР. У той же час у тварин, яких лікували Карсилом ®, була відсутня активація Г-S-ТР і спостерігалася менш виражена активація ГП. В результаті вже через 14 днів лікування сухим екстрактом спостерігалася повна нормалізація вмісту продуктів ПОЛ, в той час, як при лікуванні Карсилом ® нормалізація їх змісту відбувалася тільки до закінчення терміну лікування.

У щурів, які отримували тільки етанол, хоча і реєструвалися зміни, спрямовані на відновлення ПОЛ, але все ж зміст перекисних продуктів залишалося вище норми, т.е. не дивлячись на розвиток захисної реакції у цих тварин, її виявилося недостатньо для повного подолання окисного стресу.

У щурів, яких лікували СЕ, спостерігалося більш виражене зниження коефіцієнта окисного стресу (1,73), ніж у тварин, яких лікували Карсилом ® (7,27), що свідчило про більш повне відновлення про-антиоксидантної рівноваги у цих тварин.

А
^
*
^
*
*
*
*
^
*
*
*
*

^

60 +7 4 +21
60 +7 +14 +21
Б
^
*
*
^
*
*
*
^
*
^
^
^
^
В
^
*
*
^
^
^
^
^
60 +7 +14 +21
60 +7 +14 +21
Г
^
*
^
*
^
*
^
*
#
#
#
#
Д
*
*
^
*
*
*
^
*
*
*
^
60 +7 +14 +21
Е
^
60 +7 +14 +21
З
Ж
^
*
^
*
^
*
^
*
*
^
*
^
*
60 +7 +14 +21
^
*
^
*
^
^
*
*
^
*

60 +7 +14 +21

- контроль

екстракт

карсил

- на осі ординат - рівень інтактних тварин

* - достовірно по відношенню до вихідного контролю;

^ - достовірно по відношенню до інтактним тваринам;

# - достовірно по відношенню до контролю 1

Малюнок 5 -Вплив лікувального застосування СЕ на НАДФН-GSH-залежну систему печінки щурів при хронічній алкоголізації

На гістоморфологічної картині печінки контрольних тварин виявлялися певні патологічні зміни, найбільш виражені на 7-ий і 14-ий день додаткового напування, але на 21 день ці зміни виявлялися мінімальними. Наявність відновних процесів знайшло відображення і в зміні біохімічних показників стану печінки (зниження активності АлАТ, деяке зниження вмісту ТРГ), але більшість показників все ж залишалося вірогідно вищим, ніж в нормі і, крім того, наростали явища фиброгенеза - збільшувався вміст в печінці ОП (+ 48%) і в сироватці крові - ГАГ (+ 61%.

Відносно відновлення біохімічних показників лікувальну дію СЕ виявилося більш ефективним, ніж карсила. При застосуванні СЕ гальмувалося освіту елементів сполучної тканини: зміст ОП в усі терміни лікування достовірно не відрізнялося від норми, а вміст ГАГ в крові достовірно знижувався на 26% в порівнянні з відповідним контролем. Зменшувалися і патогистологические зміни в печінці: відзначалося зменшення клітинної інфільтрації, відсутнє фіброзірованіе портальних трактів, яке виявлялося в контролі на 14-у добу додаткового введення етанолу, а також ознаки дистрофічних змін і зберігалося лише помірне розширення портальних вен і синусоидов.

Вплив СЕ на процес фиброгенеза вивчено також при хронічному СС1 4 -гепатіте, при якому було встановлено чітке підвищення кількості ОП в печінці в порівнянні з нормальними значеннями на 82% і ГАГ в крові - на 63%.На гістоморфологічної картині також виявлялося заміщення пошкоджених гепатоцитів сполучнотканинними тяжами.

Протягом трьох тижнів після відтворення моделі хронічного гепатиту у нелікованих тварин в печінці достовірно підвищувався рівень ОП в порівнянні з вихідним контролем на 14 і 21 день на 48% і 63% відповідно, а вміст в сироватці крові ГАГ на 39% і 44% відповідно, хоча темпи наростання цих компонентів сполучної тканини дещо знижувалися.

Лікування хронічного гепатиту Карсилом ® і СЕ перешкоджало накопиченню компонентів сполучної тканини протягом всього терміну спостереження. Але у тварин, які отримували карсил, до кінця лікування на 21 добу зберігалося підвищену кількість ОП в гомогенате печінки (+ 25%).

Через два місяці після лікування сухим екстрактом зберігався стійкий лікувальний ефект, отриманий після закінчення терапії - всі основні біохімічні показники, що характеризують процеси цитолізу, холестазу, жирового переродження, перебували на рівні норми, і був відсутній процес фиброгенеза. У групі тварин, які отримували карсил, зберігалися підвищеними концентрація кон'югованого білірубіну і активність ЛФ в сироватці крові.

Досить часто гепатопротекторну активність флавоноїдів поєднується з жовчогінним ефектом, що вносить певний внесок у захист печінки. Нами встановлено, що активує вплив СЕ на жовчоутворювальну функції печінки у здорових тварин і тварин з ураженням печінки. В умовах гострого СС1 4 -гепатоза СЕ надав нормалізують, більш виражене, ніж у карсила, вплив на процеси утворення та виділення жовчі: збільшився обсяг жовчі, збільшилися зміст в жовчі ЖК і холато-холестериновий коефіцієнт. У тварин, які лікувалися Карсилом ®, концентрація ЖК не досягала рівня здорових тварин.

загальні висновки

1. Досліджувані флавоноїди і СЕ з V. abbreviate (truncatula) мають виражену гепатопротекторну дію при ураженні печінки СС1 4 і тривалої алкоголізації, зменшуючи синдроми цитолізу, холестазу, мезенхімального запалення, жирової дистрофії і печінкової недостатності, викликані розвитком окисного стресу.

2. На моделі гострого ураження печінки СС1 4 у щурів встановлено, що ефективною дозою гесперидину, діосміну, флавіціна, кверцетину і карсила є доза 100 мг / кг, а СЕ- 300 мг / кг при випробуванні їх як гепатопротекторів.

3. Досліджувані речовини при лікувально-профілактичному введенні в ефективних дозах в різному ступені впливають на розвиток основних патологічних синдромів при СС1 4 -гепатітогепатозе. Відносно усунення синдрому цитолізу флавіцін, кверцетин і карсил виявляють більш ефективну дію, ніж гесперидин і диосмин. Але гесперидин, диосмин і флавіцін перевершують кверцетин і карсил по впливу на холестаз. Активацію мезенхіми кверцетин і карсил попереджають більш ефективно, ніж флавіцін, диосмин і гесперидин. Але флавіцін і диосмин перевищують дію кверцетину, карсила і гесперидину за впливом на розвиток синдрому печінково-клітинної недостатності. СЕ практично повністю нормалізує всі вивчені показники.

4. На тлі алкогольної інтоксикації найбільша ефективність лікувально-профілактичної дії відзначається у флавіціна і СЕ, які практично повністю усувають ознаки ураження печінки, а введення гесперидину в найменшій мірі нормалізує показники всіх патологічних синдромів, що спостерігаються при гострому ураженні етанолом. Як і при СС1 4 -гепатітогепатозе, кверцетин і карсил перевищують дію діосміна на цитолиз і мезенхімального запалення і додатково на білково-синтетичну функцію печінки, але диосмин є більш ефективним за впливом на холестаз і метаболічну функцію печінки (вуглеводний і ліпідний обміни), ніж кверцетин і карсил.

5. При гострих СС1 4 - і алкогольному ураженнях печінки найвищі і близькі коефіцієнти гепатопротекція мають СЕ (95% і 97%) і флавіцін (92% і 96%), а найменший - гесперидин (65% і 38%). При СС1 4 -гепатітогепатозе флавіцін і СЕ достовірно перевищують в 1,5 - 1,6 рази ефективність дії карсила (61%) і в 1, 2 рази - кверцетину (77%). При ураженні печінки етанолом флавіцін і СЕ достовірно перевищують ефективність дії і карсила (69%) і кверцетину (70%) в 1,4 рази. Дія флавіціна і СЕ схоже як в якісному, так і кількісному відношенні.

6. Гистоморфологические дослідження підтверджують наявність більш вираженою гепатозащітним активності флавіціна і СЕ в порівнянні з Карсилом ® при СС1 4 -гепатітогепатозе і при алкогольному ураженні печінки, при введенні яких ознаки запалення, порушення мікроциркуляції і жирової дистрофії, некрози і порушення цитоархітектоніки печінкових балок, виражені в меншій ступеня, ніж у тварин, які отримували карсил.

7. Гесперидин, диосмин і флавіцін мають антиоксидантну дію invitro, пригнічуючи інтенсивність Fe 2+ -індуцірованного ПОЛ ліпосом в модельній системі, і по ефективності дії значно поступаються кверцетину: IС 50 одно відповідно 7,0 × 10 -2 М, 4,9 × 10 -2 М, 4,9 × 10 -3 М і 6,3 × 10 -5 М.

8. При лікувально-профілактичному введенні invivo при гострих токсичних ураженнях печінки СС1 4 і етанолом індивідуальні флавоноїди, а також СЕ і карсил відрізняються за впливом на ферментативне ланка АОЗ. Флавіцін і СЕ сприяють нормалізації практично всіх показників АОС, стимулюючи активності ферментів, що беруть участь в регенерації НАДФН 2 (ІЦДГ, Г-6-ФДГ, ГР). Діосмін в меншій мірі впливає на відновлення НАДФ + -редуктазной активності при обох патологіях. Гесперидин, кверцетин і карсил не впливають не тільки на певні ланки регенерації відновлювальних еквівалентів (ІЦДГ, або МДГ, або Г-6-ФДГ, або ГР), а й ферменти, що забезпечують детоксикацію перекисних продуктів (СОД, каталаза, ДП і Г- S-ТР).

9. По відновленню рівноваги в системі ПОЛ-АОС найбільшою ефективністю володіють флавіцін і СЕ при обох патологіях (коефіцієнт окисного стресу близький до 1), які хоча і в меншій мірі, ніж кверцетин пригнічують ПОЛ, але в більшій мірі сприяють збереженню активності антиоксидантних ферментів печінки .

10. Встановлено тісний зворотна кореляція між коефіцієнтом окисного стресу і відсотком гепатопротекція, що вказує на першорядне значення відновлення рівноваги в системі про- антиоксиданти для захисту печінки проти дії токсичних факторів. У його відновленні важливе значення має підтримання активності ендогенної ферментативної системи АОЗ.

11. Курсове введення гесперидину, діосміну, флавіціна і карсила здоровим тваринам в дозі 100 мг / кг призводить до деякого зниження вторинних продуктів ПОЛ в крові і активності СОД, каталази, і ДП в печінці, але має стимулюючий вплив на глутатіонової систему печінки, підвищуючи зміст GSH і активуючи ферменти, що беруть участь в регенерації GSH (ГР і НАДФ + -редуктазою) і виконання ним захисних функцій (Г-S-Т).

12. Досліджувані речовини покращують енергозабезпеченість клітин печінки, збільшують зміст АТФ, підвищують N-деметілазную і n-гідроксилазних активностей в нормі і в умовах гострих уражень печінки СС1 4 і етанолом.

13. За допомогою методу ЕПР і непрямим шляхом показано, що гесперидин, диосмин, флавіцін і кверцетин збільшують зміст NO в нормі, ймовірно, через активування eNOS і обмежують гиперпродукцию NO, стимульовану СС1 4, а також володіють ендотелій протективного дією і підвищують освіту NO, знижене в умовах моделювання ендотеліальної дисфункції. Фармакологічна модуляція синтезу NO флавоноїдами може мати суттєве значення в прояві ними гепатозащітним властивостей.

14. СЕ з V. abbreviate (truncatula) в дозі 300 мг / кг має виражену лікувальну дію при ураженні печінки СС1 4 і етанолом, посилюючи адаптаційно-пристосувальних реакцій, відновлюючи про-антиоксидантну рівновагу, енергообмін, будова, метаболізм і функції печінки, сповільнюючи процес фиброзирования, посилюючи жовчоутворювальну функцію печінки в нормі і в умовах патології. За своєю ефективністю СЕ перевищує дію карсила.

Список робіт, опублікованих за темою дисертації

1. Вплив флавоноїдів рослинного походження на перекисне окислення ліпідів // Актуальні проблеми створення нових лікарських препаратів природного походження: Матеріали Міжнар. з'їзду (4, 29 червня-1 липня 2000; Великий Новгород). - СПб., 2000. - С.155 - 157. (співавт. Оганесян Е.Т., Хочава М.Р., Мальцев Ю. А).

2. Дослідження захисної дії суми флавоноїдів з шкірки цитрусових при гострому токсичне ураження печінки СС1 4 // Людина і ліки: Тез. докл.8 Рос. нац. конгресу 2-6 квітня 2001 г. - М., 2001. - С.561. (Співавт. Хочава М.Р., Оганесян Е.Т., Фролова Л.М., Парфентьева Е.П., Москаленко С.В., Саджая Л.А., Репс В.Ф., Скульте І.В. , Андрєєва О.А., Бобильов О. В).

3. Антиоксидантні і гепатозхисні властивості флавоноїдів цитрусових // Фундаментальні науки і прогрес клінічної медицини: Матеріали Рос. конф. молодих вчених Росії з міжнар. участю (2; 24-28 квітня 2001; Москва). - М., 2001. - Т.2. - с.250. (Співавт. Хочава М.Р., Оганесян Е. Т).

4. Порівняльне вивчення гепатозахисної дії індивідуальних і сумарних флавоноїдів з шкірки цитрусових // Регіон. конф. по фармації, фармакології та підготовці кадрів (56; 2001; П'ятигорськ): Матеріали ... - П'ятигорськ: ПятГФА, 2001. - С.189 - 191. (співавт. Хочава М.Р., Оганесян Е.Т., Василенко Ю. К. ., Фролова Л.М., Парфентьева Е.П., Репс В.Ф., Москаленко С.В., Саджая Л.А., Скульте І.В., Андрєєва О.А., Бобильов О. В).

5. Дослідження захисної дії гесперидину і його одночасного застосування з амінокислотами при гострому токсичне ураження печінки тетрахлорметаном // Регіон. конф. по фармації, фармакології та підготовці кадрів (56; 2001; П'ятигорськ): Матеріали ... - П'ятигорськ: ПятГФА, 2001. - С. 192 - 194. (співавт. Хочава М.Р., Оганесян Е.Т., Василенко Ю. К. ., Фролова Л.М., Парфентьева Е.П., Репс В.Ф., Москаленко С.В., Саджая Л.А., Скульте І.В., Бобильов О. В).

6. Виділення гесперидину і сумарною флавоноидной фракції з відходів цитрусових і експериментальне вивчення їх використання в якості гепатозащітним коштів // П'ятигорськ: ПятГФА, 2002. -31с. деп. в ВІНІТІ 11.07.9.2002, № 1308-у 2002. Анн .: Бібл. указ .: Деп. наукові роботи. - 2002. - № 9 (367). - с.8 (реф.72). (Співавт. Оганесян Е.Т., Хочава М.Р., Андрєєва О.А., Василенко Ю.К., Парфентьева Е.П., Скульте І.В., Саджая Л.А., Москаленко С.В. , Постникова Н.В., Ващенко Т. Н).

7. Вивчення гепатозахисної дії флавоноїдних сполук з рослин роду Віка Паліативна медицина і реабілітація в охороні здоров'я: Матеріали конгр з міжнар. участю (4; квітень 2002; Середземномор'ї). - М., 2002. - № 2-3. (Інформація отримана з сайту) (співавт. Оганесян Е.Т., Андрєєва О.А., Шаренко О.М., Терехов А. Ю).

8. Використання квантово-хімічних методів для обґрунтування антирадикального (ОН ·) дії полігідроксіхалконов // Хім. - фармац. журнал. - 2002. - т.36, № 12. - С.21 - 25. (співавт. Оганесян Е.Т., Хочава М.Р., Тускаев В.А., Мальцев Ю. А).

9. Порівняльне вивчення ефективності гепатозахисної дії флавона діосміна і флавонони гесперидину при окремому і одночасному застосуванні у щурів з ССl 4-гепатоз // Розробка, дослідження і маркетинг нової фармацевтичної продукції: зб. науч. тр. / П'ятигорськ: ГФА. - П'ятигорськ, 2004. - Вип.59. - С.266-268. (Співавт. Агаджанян З.С., Паукова Е.О., Шаренко О.М., Андрєєва О.А., Оганесян Е. Т).

10. Вивчення впливу глікозидів діосметіна і гесперидину на мікросомальне окислення в нормі і при з ССl4-гепатозі у щурів. гепатоз // Розробка, дослідження і маркетинг нової фармацевтичної продукції: зб. науч. тр. / П'ятигорськ: ГФА. - П'ятигорськ, 2004. - Вип.59. - С.270-271. (Співавт. Саджая Л.А., Біляч Я.І. Ващенко Є. С).

11.Вивчення впливу рослинних флавоноїдів на показники енергетичного обміну при гострому ССl 4-гепатозі // Актуальні проблеми створення нових лікарських препаратів природного походження: матеріали міжнар. з'їзду: "Фітофарм 2004" (8; 21-23 червня 2004; Міккелі, Фінляндія). СПб .: ВВМ, 2004. - С.173-176. (Співавт. Андрєєва О.А., Шаренко О.М., Паукова Е.О., Агаджанян З.С., Біляч Я.І., Ващенко Е.С., Агаджанян В. С).

12. гепатозащітним дію флавоноїдів вікі мінливою і вики обрубаної // Фармація. - 2004. - № 4. - С.41 - 42. (співавт. Оганесян Е.Т., Андрєєва О.А., Шаренко О.М., Терехов А. Ю).

13. гепатозащітним дію квіток чорнобривців // Фармація. - 2004. - № 2. - С.33-35. (Співавт. Терехов А.Ю., Оганесян Е.Т., Андрєєва О.А. та ін.).

14. Про біологічно активних речовинах деяких представників роду Vicia // Сучасні наукомісткі технології: зб. науч. тр. - М., 2004. - №6. - с.108-109. (Співавт. Оганесян Е.Т., Андрєєва О.А., Шаренко О.М. та ін.).

15. Вивчення гепатозахисної дії природних флавоноїдних сполук // т фіз. і клинич. фармакологія. - 2004. - Т.67, №6. - С.41 - 45.

16. Вивчення ефективності гепатозахисної дії флавіціна і СЕ з вікі обрубаної (Vicia truncatula Fish ex Bieb) на моделі гострого тетрахлорметанового гепатозу у щурів. // Розробка, дослідження і маркетинг нової фармацевтичної продукції: зб. науч. тр. / П'ятигорськ: ГФА. - П'ятигорськ, 2005. - Вип.60. - С.330-333. (Співавт. Агаджанян З.С., Паукова Е.О., Шаренко О.М., Андрєєва О.А., Скульте І.В., Біляч Я.І., Ващенко Е.С., Агаджанян В. С) .

17. Захисна дія флавоноїдних антиоксидантів кверцетину, гесперидину, діосміну і флавіціна при тетрахлорметанового индуцированном оксидативному стресі в печінці щурів. // Розробка, дослідження і маркетинг нової фармацевтичної продукції: зб. науч. тр. / П'ятигорськ: ГФА. - П'ятигорськ, 2005. - Вип.60. -С.333-336. (Співавт. Паукова Е.О., Агаджанян З.С., Парфентьева Е.П., Оганесян Е.Т., Андрєєва О.А., Шаренко О. М).

18. Антиоксидантное і мембраностабілізуючу дію природних флавоноїдів при гострому експериментальному тетрахлорметанового гепатозі. // Розробка, дослідження і маркетинг нової фармацевтичної продукції: зб. науч. тр. / П'ятигорськ: ГФА. - П'ятигорськ, 2005. - Вип.60. - С.336-338. (Співавт. Паукова Е.О., Агаджанян З.С., Саджая Л.А., Павлова Л. М).

19. Вплив антиоксидантів флавоноїдної природи на перекисне і митохондриальное окислення і антиоксидантний статус у щурів при гострому CCl4-гепатозі // Актуальні проблеми створення нових лікарських препаратів природного походження: матеріали Міжнар. з'їзду "Фітофарм 2005" і Конф. молодих вчених Європ. фітохім. суспільства "Рослини і Здоров'я" (9; 22-25 червня 2005; Санкт-Петербург). - СПб .: НІІХ СПбГУ, 2005. - С.77-80. (Співавт. Парфентьева Е.П., Саджая Л.А., Шаренко О.М., Паукова Е.О., Андрєєва О.А., Оганесян Е. Т).

20. Кверцетин і гесперидин пригнічують утворення радикалів оксиду азоту в печінці і серце щурів в умовах гострого гепатозу // Біофізика. - 2005. - Т.50, №6. - С.1145 - 1149. (співавт. Тимошин А.А., Паукова Е.О., Ванін А. Ф).

21. Використання рослинних екстрактів для усунення синдрому холестазу при експериментальному ураженні печінки // Известия вищих навчальних закладів. Сівши. - Кавк. регіон. Гастроентерологія. Природний. науки. - Спецвипуск. - 2005. - С.86 - 87. (співавт. Терехов А.Ю., Паукова Е.О., Шаренко О.М., Андрєєва О.А., Саджая Л. А).

22. гепатозащітним дію ангиопротекторов флавоноидной природи // Гепатологія сьогодні: матеріали Десятої Рос. конф.28-30 березня 2005, Москва / Ріс. журн. гастроентерології, гепатології, колопроктології. - 2005. - т.15. - №1. - Додаток №24. - С.100. (Співавт. Паукова Е.О., Шаренко О.М., Андрєєва О. А).

23. Кверцетин і гесперидин пригнічують продукцію NO-радикалів в умовах суворо СCl 4 -гепатоза // Активні форми кисню, оксид азоту, антиоксиданти і здоров'я людини: зб. тр. нац. науч. - практ. конф. з міжнар. участю (4; 26-30 сент. 2005; Смоленськ). - Смоленськ, 2005. - С.172-174. (Співавт. Тімошін.А.А., Паукова Е.О., Ванін А. Ф).

24. Амброзія полинолиста - джерело фармакологічно активних сполук. Повідомлення 2 // Хім. - фарм. журнал. - 2006. - Т.40, №11ю - С.46 - 51. (співавт. Пархоменко О.Ю., Оганесян Е.Т., Андрєєва О.А., Паукова Е.О. і ін.).

25. Вплив біофлавоноїдів на про- / антиоксидантну рівновагу при гостре алкогольне отруєння // Гепатологія сьогодні: матеріали Одинадцятої Рос. конф.27-29 березня 2006, Москва / Ріс. журн. гастроентерології, гепатології, колопроктології. - 2006. - т.16. - №1. - Додаток №27. - С.68. (Співавт. Сергєєва Е.О., Парфентьева Е.П., Саджая Л.А., Шаренко О. М).

26. Вплив біофлавоноїдів на мікросомальне і митохондриальное окислення при CCl 4 -гепатозе // Людина і ліки: тез. докл.13 Рос. нац. конгр.3-7 квіт. 2006 - М., 2006. - С.520-521. (Співавт. Оганесян Е.Т., Сергєєва Е.О., Шаренко О.М., Андрєєва О.А., Парфентьева Е.П., Саджая Л.А., Скульте Л. А).

27. Фітохімічне вивчення складу надземної частини рослин вики мінливою (ViciavariabilisFreynetSint) і вики Гроссгейма (VicaGrossheimiiFreynetSint) // Людина і ліки: тез. докл.13 Рос. нац. конгр.3-7 квіт. 2006 - М., 2006. - С.609. (Співавт. Шаренко О.М., Андрєєва О.А., Крікова А.В., Сергєєва О. О., Самойленко Є. С).

28. Мембраностабілізуюча дію біофлавоноїдів при гостре алкогольне отруєння у щурів // Розробка, дослідження і маркетинг нової фармац. продукції: зб. науч. тр. / П'ятигорськ. ГФА. -Вип.61. -Пятігорск: ПятГФА, 2006. - С.382-383. (Співавт. Сергєєва Е.О., Саджая Л.А., Павлова Л. М).

29. Зміна деяких біохімічних показників у щурів при гострому алкогольному отруєнні і дії біофлавоноїдів // Розробка, дослідження і маркетинг нової фармац. продукції: зб. науч. тр. / П'ятигорськ. ГФА. -Вип.61. -Пятігорск: ПятГФА, 2006. - С.347-349. (Співавт. Сергєєва Е.О., Оганесян Е.Т., Парфентьева Е.П., Скульте І.В., Ващенко Е.С., Біляч Я. І, Шаренко О.М., Андрєєва О. А).

30. Вплив гесперидину на рівень оксиду азоту (NO) в організмі щурів в нормі і при гострому ураженні печінки тетрахлорметаном // Молекулярні, мембранні і клітинні основи функціонування біосистем: Міжнар. науч. конф .; Сьомий з'їзд Білорус. громадського об'єднання фотобіологія і біофізиків, Мінськ, 21-23 червня 2006 р .: збірник статей. - Мн .: ІООО "Право і економіка", 2006. - Т.2. - С.261-263. (Співавт. Тимошин А.А., Сергєєва Е.О., Ванін А.Ф., Оганесян Е. Т).

31. Вивчення механізмів гепатозахисної дії біофлавоноїдів при гостре алкогольне отруєння у щурів // Украiнська. бiохiм. з ¢ iзд. (9; 24-27 тварин 2006; Харькiв): матерiали ... - Харькiв, 2006. - Т.2. - С.50. (Співавт. Парфентьева Е.П., Саджая Л. А).

32. Вплив гесперидину і флавіціна на печінковий кровотік в нормі і в умовах стимуляції і блокади синтезу ендогенного оксиду азоту // Регіонарне кровообіг і мікроциркуляція. - 2006. - Т.5, №. - С.84 - 87. (співавт. Тюренков І.М., Воронков А. В).

33. Вивчення біохімічних основ захисної дії флавоноїдів при експериментальному ураженні печінки // Звіт НДР. (Співавт. Василенко Ю.К., Парфентьева Е.П., Саджая Л.А., Скульте І.В., Мазурина М.В., Паукова Е. О).

34. Корекція биофлавоноидами біохімічних показників печінки при гострому алкогольному отруєнні у щурів // Гепатологія сьогодні: матеріали Дванадцятої Рос. конф. 19-21 березня 2007, Москва / Ріс. журн. гастроентерології, гепатології, колопроктології. - 2007. - Т.17. - №1. - Додаток №29. - С.64. (Співавт. Сергєєва Е.О., Парфентьева Е.П., Саджая Л.А., Скульте Л.А., Оганесян Е.Т., Шаренко О.М., Андрєєва О.А., Духанина І. В)

35. Вплив біофлавоноїдів на перекисне окислення ліпідів та антиоксидантні системи печінки щурів при гострому алкогольному отруєнні // Вісник ВГМУ. - Т.23, №3. - 2007. - С.50-52. (Співавт. Сергєєва Е.О., Оганесян Е.Т., Парфентьева Е.П., Саджая Л.А., Терехов А.Ю., Скульте І.В., Шаренко О.М., Андрєєва О.А. , Духанина І. В).

36. Вплив флавоноїдів на перекисне окислення ліпідів та антиоксидантні ферменти в печінці щурів // Фармація із століття в століття. Частина V. Синтез біологічно активних речовин для створення фармацевтичних субстанцій. Фармаколог. дослідження: Праці наук. - практ. конф. - Снкт-Петербург, 2008. - С.67 - 71. (співавт. Сергєєва Е.О., Парфентьева Е.П., Саджая Л.А., Терехов А.Ю., Скульте І. В).

37. Вивчення впливу біофлавоноїдів на показники енергетичного обміну при курсової алкоголізації у щурів // Гепатологія сьогодні: матеріали Тринадцятої Рос. конф.17-19 березня 2008, Москва / Ріс. журн. гастроентерології, гепатології, колопроктології. - 2008. - т.18. - №1. - Додаток № 31. - С.54. (Співавт. Сергєєва Е.О., Терехов А.Ю., Парфентьева Е.П., Саджая Л.А., Скульте І. В).

38. Вивчення гепатозахисної дії СЕ з вікі обрубаної (ViciatruncatulaFishexBieb) при гострому тетрахлорметанового гепатозі у щурів // Розробка, дослідження і маркетинг нової фармац. продукції: зб. науч. тр. / П'ятигорськ. ГФА. -Вип.63. -Пятігорск: ПятГФА, 2008. - С.409-412. (Співавт. Сергєєва Е.О., Саджая Л.А., Парфентьева Е.П., Терехов А.Ю., Скульте І.В., Андрєєва О.А., Шаренко О. М)

39. Вивчення впливу флавоноїдів на систему детоксикації ксенобіотиків в нормі і при токсичних ураженнях печінки у щурів // Розробка, дослідження і маркетинг нової фармац. продукції: зб. науч. тр. / П'ятигорськ. ГФА. - Вип.63. -Пятігорск: ПятГФА, 2008. - С.412-414. (Співавт. Сергєєва Е.О., Саджая Л.А., Шаренко О.М., Андрєєва О. А).

40. Вивчення впливу флавоноїдів на системи детоксикації ксенобіотиків при курсової алкоголізації у щурів // Гепатологія сьогодні: матеріали Чотирнадцятої Рос. конф.16-18 березня 2009, Москва / Ріс. журн. гастроентерології, гепатології, колопроктології. - 2009. - Т. 19. - №1. - Додаток № 33. - С.74. (Співавт. Сергєєва Е.О., Терехов А.Ю., Парфентьева Е.П., Саджая Л.А., Скульте І. В).

41. Вплив флавіціна на механізми, які беруть участь у розвитку окисного стресу при курсовому введенні здоровим тваринам // Розробка, дослідження і маркетинг нової фармац. продукції: зб. науч. тр. / П'ятигорськ. ГФА. -Вип.64. -Пятігорск: ПятГФА, 2009. - С.418-421. (Співавт. Сергєєва Е.О., Терехов А.Ю., Саджая Л.А., Парфентьева Е.П., Скульте І.В., Духанина І. В).

42. Вивчення впливу гесперидину на ендотеліальну функцію тварин з експериментально викликаним на цукровий діабет // Бюлл. Волгогр. наукового центру РАМН. - 2009. - №1. - С. 19-22. (Співавт. Тюренков І.М., Воронков А.В., Сліецанс А.А., Доркина Е. Г).


  • Актуальність проблеми
  • Мета і завдання роботи
  • Наукова новизна отриманих результатів
  • Рівень впровадження результатів дослідження
  • Звязок з планом НДР ГОУ ВПО "Пятигорська ГФА Росздрава"
  • Апробація отриманих результатів
  • Положення, що виносяться на захист
  • Матеріали і методи дослідження
  • Основний зміст роботи
  • Список робіт, опублікованих за темою дисертації

  • Скачати 104.76 Kb.