діагностика лейкозу






    Головна сторінка





Скачати 54.42 Kb.
Дата конвертації06.09.2018
Розмір54.42 Kb.
Типзвіт по практиці

Міністерство освіти та науки України

Львівський національний університет імені Івана Франка

Кафедра біофізікі та біоінформатікі

ЗВІТ

про проходження виробничої індівідуальної практики

Виконала:

Студентка V курсу, БЛБ-52з

Костур Л.В.

Перевіріла:

доц. Гарасим Н.П.

Львів-2015

Зміст

Вступ

Розділ I. ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ

1.1 Характеристика та етіологія лейкозу

1.2 Фактори ризики розвитку лейкемії.Патогенез та клінічна картина

1.3 Діагностика лейкозів

1.4 Трансплантація кісткового мозком

1.5 Побічні ефект лікування

1.6 Лікування после пересадки кісткового мозком

Розділ II. МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ

2.1 Характеристика об'єкта дослідження

2.2 Виготовлення фіксованіх препаратів

2.3 Загальні методи фарбування

2.4 Метод фарбування зрізів гематоксілін-еозіном

2.5 Метод фарбування гістопрепаратів Романовського-Гімза

Розділ III.РЕЗУЛЬТАТІ ТА ЇХ Обговорення

Висновки

список літератури

ВСТУП

Чому розвівається лейкемія у дітей? Як вона проявляє себе и Яким чином лікується? Які ж самє інфекції могут сделать подібний Вплив на організм дитини? ЦІ и много других вопросам цікавлять всех онкологів світу.

Лейкемімя (білокрів'я) - онкологічне захворювання клітін крови, что уражає кістковій мозок и інші кровотворні органи. Основною Ознакою лейкемії є велика Кількість лейкоцітів. ЦІ Клітини, что дегенерувалі и Втратили захисні Функції нормальних лейкоцітів, знищують здорові Клітини, после чого пацієнт становится беззахіснім перед будь-Якою інфекцією. Лікування таких Хворов проводитися с помощью опромінення и цитотоксичних препаратів для придушенням розмноження клітін, что дегенерувалі, або трансплантацією кісткового мозком (Gross S., 1996).

За останні роки відмічається віражах тенденція до зростання цієї важкої патології як среди дорослих, так і серед дітей (омолодження). Зберігається висока летальність, растет частота віпадків нелімфоїдніх форм лейкемії. Тому проблема лейкемії у педіатрічній практике Надзвичайно висока.

Розкриття етапів лейкозного процесса має велике практичне значення, оскількі головний его сенс Полягає у пошуках цитостатичних препаратів, адекватних кожному етапу злоякісності.

Метою даної роботи є оволодіті методами фарбування кісткового мозком та діагностуваті на гістопрепаратах лейкози.

завдання:

Навчітіся виготовляти гістопрепараті кісткового мозком.

Вівчіті метод фарбування тканин гематоксілін-еозіном та провести аналіз зразків кісткового мозком.

Освоїті метод фарбування препаратів Романовського-Гімзе.

лейкоз гістопрепарат кістковій мозок

Розділ 1.ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ

1.1 Характеристика та етіологія лейкозу

Лейкоз - злоякісне захворювання системи крови, Пожалуйста характерізується переважанням процесів розмноження клітін кісткового мозком, а іноді з'явиться патологічніх Вогнище кровотворення у других органах. Лейкози за своим походження блізькі до пухлина. До лейкозів відносіться широка група захворювань, різніх за своєю етіологією. При лейкозах злоякісній клон утворюється з незріліх гемопоетичних клітін кісткового мозком (Воробйова А.І., 1985).

Термін "лейкоз" предложили в 1921 р. Еллерман. Даній вид раку розвівається в кістковому мозком, в м'якій губчастій части кісткі, відповідальної за відтворення кров'яних клітін. Если у дитини розвівається лейкемія, кістковій мозок віробляє незрілі білі кров'яні Клітини, Які НЕ здатні перетворюватіся в нормальні Клітини крови. Лейкозні Клітини відтворюють Самі собі, таким чином, клонуючі Хворі ракові Клітини крови. Лейкемії займають почти половину всех злоякісніх новоутворень, что зустрічаються в дитячому віці. За данімі Peller лейкемія ставити 44% віпадків усіх злоякісніх новоутворів у дітей Англии, в США - 47%. У тій же година у дорослих Частка лейкемій в структурі онкопатології складає від 1,0 до 3,5%. Пік захворюваності Гостра лекемією у віці 3-4 р. У родіні, де є Хворі на лейкемію, ризики такоже захворіті Гостра лейкемією у 3-4 роки вищий, чем у других сім'ях. У дітей ВІКОМ 0-14 р. лекемія Частіше зустрічається у хлопчиків: 4,4% на 100 тис. населення, у дівчаток: 3,2% на 100 тис. населення (Данія). У такому городе як Івано-Франківськ ймовірність лейкозу до дев'яти віпадків среди дітей на протязі року (Алексєєв Н.А., 1998).

После Чорнобильської катастрофи значний Зросла увага до проблем дитячої онкогематології. Гематологи вважають, что унаслідок аварії на ЧАЕС з'явилися Нові форми хвороби, Які Важко піддаються лікуванню и Частіше начали реєструваті пріродженій лейкоз.

За останні роки відмічається віражах тенденція до зростання цієї важкої патології як среди дорослих, так і серед дітей (омолодження). Зберігається висока летальність, зростанні частота віпадків нелімфоїдніх форм лейкемії. Тому проблема лейкемії у педіатрічній практике Надзвичайно висока. Частота Виникнення лейкемій у дітей відносіться до Гостра форм лейкемії, оскількі хронічні форми у дітей зустрічаються Рідко, а хронічна лімфобластна лейкемія у дітей ще не описана.

До теперішнього часу етіологія Гостра лейкозу до кінця не встановлено. Сучасна концепція етіології и патогенезу засновано на пріпущенні про етіологічну роль різніх ендогенніх и екзогенніх чінніків (онкогенні віруси, неспріятліві Чинник зовнішнього середовища, іонізуюча радіація и т.д.), что прізводять до мутації соматичних або зародковіх клітін, что відносяться до системи кровотворення (Алексєєв Н.А., 1989). Будь-яка причина лейкозу виробляти до збою роботи імунної системи. Для того щоб людина захворіла на лейкоз, Досить щоб одна єдина кровотворних клітина перейшла в ракову. Вона начинает Швидко діліться и дает початок клону пухлина клітін. Живі ракові Клітини, что Швидко діляться, поступово займають місце нормальних и розвівається лейкоз. Із цього приводу існує много різніх думок. Деякі Вчені вважають, что причиною лейкемії у дітей, в більшості віпадків, є електромагнітне поле, Пожалуйста утворює довкола себе побутова техніка, а зокрема комп'ютери. Американські Вчені проводили дослідження на Цю тему, Які показали, что среди Хворов лейкемією дітей більшість вітрачалі НЕ менше двох годин на добу на ігри перед монітором комп'ютера. Випромінювання вплівають на хромосоми, породжують в них Різні мутації, что виробляти до Порушення кровотворення и лейкемії. Особливо чутліві до Дії електромагнітного випромінювання діти шкільного віку, організм якіх Ще не сформувався: даже Всього декілька годин в тиждень, проведених біля комп'ютера, небезпечні для їхнього здоров'я. Хромосомні Зміни віявляють примерно в 60-70% хвороб. Передбачається, что смороду вінікають під Вплив несприятливого чінніків зовнішнього середовища: іонізуючого випромінювання, електромагнітного поля, хімічніх Речовини, бензолу, медікаментів, до складу якіх входять алкаліруючі сполуки.

Ще один Чинник, Який может спровокуваті розвиток лейкемії, - це звічайні Інфекційні захворювання, на Які хворіють всі діти. До такого висновка Прийшли англійські Вчені. Смороду вважають, що, з одного боку, інфекції роблять добру дело для імунітету маляти, формуючі его. Але, з Іншого боку, деякі віруси могут прізвесті до тих самих хромосомних мутацій. При Дії інфекції, як частина нормальної імунної ВІДПОВІДІ, в кістковому мозком відбувається активне Утворення білих клітін крови - лейкоцітів. У людей, что ма ють генетичну Схильність до лейкемії, может відбутіся збій, в результате которого контроль над Розмноження ціх клітін втрачається, что и виробляти до їхніх патологічніх змін и неконтрольованого поділу. Які ж самє інфекції могут сделать такий Вплив на організм дитини? На жаль, на сегодня Вчені точно не могут відповісті на це питання. Важліво відмітіті, что для розвитку лейкемії одних вірусів НЕ достаточно. Необхідна ще и наявність схільності організму до лейкемії. Цікаво и, что на лейкемію Частіше хворіють діти у промислово розвинення державах.

1.2 Фактори ризики розвитку лейкемії. Патогенез та клінічна картина

До факторів ризики лейкемії відносяться:

Вік - Частіше хворіють діти у віці 2-4 років ( "дитячий пік"), что відображає пренатальні походження захворювання и пов'язане з більшою напруженістю проліферативних процесів в системе В-лімфоцитів у плода, новонароджених и дітей грудного віку з наявністю латентного ПЕРІОДУ до двох років и співпадає з особливо інтенсівною Перебудова кісткового мозком;

Стати - Частіше хворіють хлопчики;

Діти з Ознака підвіщеного фізічного розвитку, макросомією лица хворіють Частіше. Підтвердженням цьом є ті, что лейкемії у дітей более пошірені у скандинавських странах (странах басейну Балтійського моря (естонці) - в зоне найбільше вісокоросліх людей;

Діти з гіперплазією тимуса, з явнімі ознака актівізуючої Дії на периферичної ланку імунної системи, зокрема лімфоцити періферійної крови (акселеративного лімфатізм - варіант конституції);

Діти від матерів до 35 років, у якіх перед дере пологами були мед. аборти, Загрози вікідню в Ранні Терміни вагітності;

Лейкопенії, лімфоаденопатії во время інфекційніх захворювань;

Провокуючі впливи, зокрема рентгенологічне дослідження во время вагітності матері, часті рентгенологічні обстеження ОРГАНІВ грудної кліткі дитини (опромінення кісткового мозком).

Основною Ланка в розвитку хвороби є ті, что неспріятліві Чинник прізводять до змін (мутацій) в клітінах кровотворення. При цьом Клітини реагують неспіннім зростанням, неможлівістю діференціювання и зміною швідкості нормального дозрівання. Тому всі Клітини, Які складають лейкемічну пухлина, є похідною однієї стовбурової Клітини або Клітини-попередника будь-которого напряму кровотворення.

Патогенез.

Віділяють лейкози Гостра и хронічній (Романова А.Ф., 2002). Форма захворювання візначається НЕ трівалістю и гостротою клінічніх проявів, а будова пухлина клітін. До Гостра відносіться лейкоз, клітінній субстрат которого уявлень бластома (незрілімі клітінамі), а до хронічного - лейкоз, при якому Основна маса пухлина клітін діференційована и складається, в основному, Із зріліх елементів.

ШВИДКІСТЬ зростання Залежить від долі активно проліферірующіх клітін, їх генераційного годині, числа клітін с ограниченной трівалістю життя, швідкості Втрата клітін. Коли лейкемічна популяція досягає певної масі, відбувається гальмування діференціювання нормальних стовбурових клітін и різко падає нормальне продукування. A. Mauer (1973), побудував математичного модель проліферації при Гостра лімфобластному лейкозі, з врахування ціх умів, обчислено годину, необхідній для напрацювання з однієї патологічної Клітини лейкемічного клону, масою 1 кг (1012 клітін), тобто для прогресування хвороби, - 3, 5 років. Це годину добро узгоджується з клінічнімі данімі: пік захворюваності Гостра лімфобластнім лейкозом у дітей пріпадає на вік від 2 до 5 років. "Вибух" захворюваності Гостра лейкозом в тих жителей, что перенесли атомне бомбардування Хіросімі, такоже ставити через такий проміжок часу (Isbistej RP, 1988).

Бластні Клітини при Гостра лейкозі втрачають ферментну спеціфічність.Клітини стають такими, что НЕ діференціюються (Баришніков А.Ю., 1985). Смороду характеризуються: зміною ядра и цитоплазми (вместо великих з'являються Клітини неправільної форми Із збільшенням площади ядра и цитоплазми; Володіють здатністю зростаті поза органами гемопоезу (проліфераті з лейкозних клітін знаходять в шкірі, Нирко, головному мозком и в мозковий оболонках), смороду нерівноцінні и представляються Різні етапи прогресії;

ма ють стрібкоподібній відхід пухлини з-під цитостатичної Дії, а такоже променево, гормонального; наростання процесса у виде Вихід бластних елементів в периферичної кров, переходу від лейкопенії до лейкоцитоз. Етапи пухлінної прогресії - це етапи злоякісності лейкозу. У Основі даної прогресії лежить нестабільність генетичного апарату лейкозних клітін, Яким властівій перехід з неактивного стану в активний. Розкриття етапів лейкозного процесса має велике практичне значення, оскількі головний его сенс Полягає у пошуках цитостатичних препаратів, адекватних кожному етапу злоякісності (Вершиніна С.Ф., 2005; Шиффман Ф.Д., 2000).

Клінічна картина.

Захворювання часто почінається поволі з з'явилася невизначенності Скарга на болі в кістках и суглоб, стомлюваність, зниженя апетиту, Порушення сну, Підвищення температури тела. Рідше спостерігають Раптовий початок захворювання з виразу інтоксікацією, геморагічнім синдромом.

1) Шкірні покриви и слізові оболонки Хворов бліді, рідше жовтянічні, Інколи шкіра набуває землисто-зеленувато відтінку. Можливі гінгівіті и стоматиту (від катаральних до віразково-некротичних), лейкемічна інфільтрація кожи и слизової оболонок. Часто відзначають бачимо Збільшення лімфатічніх вузлів. Смороду ма ють щільноеластічну консістенцію, безболісні, які не спаяні з навколішнімі тканинами. Інколи визначаються симптомокомплекс Мікуліча - симетрично Збільшення слізніх и слінніх залоза унаслідок їх лейкемічної інфільтрації.

У цьом випадка за рахунок наряклості особини діти зовні нагадують Хворов з епідемічнім паротит.

2) Геморагічній синдром - одна з найбільш яскраве І частина ознакою. У Хворов віявляють крововіліві в шкірі и слізовіх оболонках, кровотечі з носа, ясен и шлунково-кишково тракту, гематурію, крововіліві в мозок (Крюков М.Г., 1998).

3) Болі в суглоб и кістках могут буті обумовлені лейкемічною інфільтрацією синовіальної оболонки, з'явилися окістніх лейкозних інфільтратів, кровопроліттям в суглобово порожніну.

4) Частий симптом Гостра лейкозу - гепатоспленомегалія. Могут буті кардіоваскулярні розладі у виде тахікардії, глухості тонів серця, функціональніх шумів; рідше відзначають Розширення кордонів серця. Можливий розвиток пневмонії.

5) Ураження центральної нервової системи (нейролейкоз) розвівається унаслідок метастазування бластних клітін в нервово систему. Найчастіше це відбувається в початковий период захворювання у зв'язку з тім, что препарати, Які вжіваються для лікування лейкозу, що не пронікають через гематоенцефалічтній бар'єр. Найчастіше нейролейкоз віявляють у хворого на тлі нормальних показніків кровотворення. Клінічна картина нейролейкоз розвівається поступово. З'являються Запаморочення, головний біль, Нудота, діплопія, болі в хребті и міжребер'ях. У Деяк дітей відзначають різке Збільшення масі тела за короткий проміжок часу, болемію, что пов'язане з Ураження діенцефальної області. Інколи нейролейкоз віявляють Випадкове при клінічному обстеженні хвороби.

У перебігу лейкозу віділяють три стадії (что необхідне для визначення лікувальної тактики):

I стадія - пік захворювання, период від качана клінічніх проявів до здобуття ЕФЕКТ від терапії, что проводитися.

II стадія - ремісія. Розрізняють повну и неповну ремісії. При повній клініко-гематологічній ремісії (длительность НЕ менше одного місяця) клінічніх проявів немає, а в мієлограмі визначаються НЕ більше 5% бластних клітін и не более 30% лімфоцитів. Неповна клініко-гематологічна ремісія супроводжується нормалізацією клінічніх показніків и гемограмі, а в пунктах червоного кісткового мозком зберігається НЕ більше 20% бластних клітін.

III стадія - рецидив захворювання. Частіше ВІН почінається з з'явилася екстрамодулярніх Вогнище лейкозної інфільтрації в яєчках, нервовій сістемі, легень на тлі нормальних показніків гемопоезу. При гематологічному рецідіві много хвороба не віявляють жодних Скарга. У Деяк дітей рецидив діагностують лишь на підставі дослідження червоного кісткового мозком. Менш віражах симптоматика в период рецидиву Гостра лейкозу пов'язана з Безперервна комплексним лікуванням, стрімуючім розвитку захворювання.

Перебіг.

При лейкозі пухлина тканина спочатку розростається у місці локалізації кісткового мозком та поступово заміщує нормальні Клітини кровотворення (Сєрова В.В., 1998). В результате цього процесса у хворого на лейкоз закономірно розвіваються різні варіанти цітопеній - анемія, тромбоцітопенія, лімфоцітопенія, гранулоцітопенія, что виробляти до збільшеної кровоточівості, крововілівів, Зменшення імунітету з прієднанням інфекційніх ускладнень.

Метастазування при лейкозі супроводжується з'явиться лейкозних інфільтратів у різніх органах - печінці, селезінці, лімфатічніх Вузли та ін. В органах могут розвіватіся Зміни, зумовлені обтурацією Судін пухлина клітінамі - інфаркті, віразково-некротічні ускладнення.

Класифікація

Можна віділіті п'ять основних Принципів класіфікації (Глузман Д.Ф., 2005):

За характером перебігу.

гострі, Які перебігають менше року, та хронічні, что існують довгий час (але необходимо відмітіті, что Гостра лейкоз Ніколи не переходити у хронічній, а хронічній Ніколи НЕ загострюється - таким чином, Терміни «Гостра» та «хронічній» Використовують только для зручності; значення ціх термінів у гематології відрізняється від значення в других медичний дісціплінах);

За ступенями діференціювання пухлина клітін:

недіференційовані,

бластні,

цітарні лейкози;

Согласно з цітогенезом. Ця класифікація засновується на уявленнях про кровотворення.

Гострі лейкози за цітогенезом поділяються на:

лімфобластній,

мієлобластній,

монобластний,

мієломонобластній,

ерітромієлобластній,

мегакаріобластний,

недіференційованій.

Хронічні лейкози представлені лейкоз:

А. мієлоцітарного походження:

хронічній мієлоцітарній лейкоз,

хронічній нейтрофільній лейкоз,

хронічній еозінофільній лейкоз,

хронічній базофільній лейкоз,

мієлосклероз,

ерітремія / Справжня поліцітемія,

есенціальна тромбоцітемія,

Б. лімфоцітарного походження:

хронічній лімфолейкоз,

парапротеїнемічні лейкози:

мієломна хвороба,

первинна макроглобулінемія Вальденстрема,

хвороба важка ланцюгів Франкліна,

лімфоматоз кожи - хвороба Сезарі,

В. моноцитарного походження:

хронічній моноцитарний лейкоз,

хронічній мієломоноцітарній лейкоз,

гістіоцітоз Х.

З точки зору данної класіфікації можна Говорити про відносній перехід хронічніх лейкозів у гострі лейкози при трівалій Дії етіологічних факторів (дія вірусів, іонізуючого випромінення, хімічніх Речовини ТОЩО). Тобто окрім порушеннях клітін-попередніків мієло- або лімфопоезу розвіваються Порушення, характерні для Гостра лейкозів; відбувається «ускладнення» перебігу хронічного лейкозу (Саркісов Д.С., 1999; Сєрова В.В., 1998).

На Основі імунного фенотипу пухлина клітін

В наш час стало можливіть Проводити точніше типування пухлина клітін залежних від їхнього імунного фенотипу за експресією CD19, CD20, CD5, легких ланцюгів імуноглобулінів та других антигенів маркерів.

5) За загально числом лейкоцітів та наявністю бластних клітін у періферічній крови:

лейкемічні (більш 50-80Ч109 / л лейкоцітів, в тому чіслі бласти),

сублейкемічні (50-80Ч109 / л лейкоцітів, в тому чіслі бласти),

лейкопенічні (вміст лейкоцітів в періферічній крови нижчих норми, но є бласти),

алейкемічні (вміст лейкоцітів у періферічній крови нижчих норми, бласти відсутні).

У групі хронічніх лейкозів найчастіше зустрічаються мієлолейкоз та лімфолейкоз.

1.3 Діагностика лейкозів

Рання діагностика відіграє важліву роль у віліковуванні лейкозу. Розпізнати лейкемію можна за дерло симптомами: підвіщеною втому, сонлівістю або Безсонов, депресією, что почінається. Більшість сімптомів лейкозу НЕ є спеціфічнімі. Деякі з ціх сімптомів могут буті віклікані іншімі проблемами, например, інфекцією (Кассирский І. А., 1970). З цієї причини потрібне встановлення точного діагнозу, для чого, передусім, треба досліджуваті периферичної кров (узяті кров з пальця). При віявленні порушеннях дитину направляються в спеціалізоване відділення для Подальшого обстеження, такого як:

1. Дослідження мазків крови під мікроскопом - дозволяє запідозріті лейкоз.

2. Дослідження пункції кісткового мозком и біопсія. При біопсії кісткового мозком отримуються маленький шматочок кісткі и кісткового мозком. Ця процедура віконується при первінній діагностіці І, в подалі, для ОЦІНКИ ефектівності лікування.

3. Біохімічній аналіз крови. Дослідження крови дает можлівість діагностуваті інфекцію, яка может вінікнуті Із-за ослабленої імунної системи.

4. спинномозкової пункція. Ця процедура віконується з метою діагностики Ураження головного и спинного мозком.

5. Біопсія лімфатічного Вузли.

6. Цітохімія. При Спеціальному фарбуванні пухлина клітін уточнюється тип лейкозу.

7. Імуноцітохімія. При цьом дослідженні аналізується зміна забарвлення лейкозних клітін, по якому встановлюється тип лейкозу.

8. Цитогенетика (Третяк Н.М., 2004).

У нормі Клітини людини містять 46 хромосом. При Деяк типах лейкозу частина хромосоми может відійті до Іншої хромосоми. Цю зміну - транслокацію - зазвічай можна віявіті під мікроскопом. Виявлення ціх транслокацій допомагає уточніті певні типи Гостра лімфобластного лейкозу и Гостра мієлоїдного лейкозу и важліве при візначенні прогнозом хвороби. При Деяк типах лейкозу є Порушення кількості хромосом. Например, Клітини при Гостра лімфобластному лейкозі з більш чем 50 хромосомами чутлівіші до хіміотерапії, а Клітини з Менш чем 46 хромосомами Менш чутліві до лікування (Торубарова Н.А., 1998).

9. Молекулярно-генетичні дослідження. Деякі рецептори, что назіваються рецепторами антігенів, з'являються на поверхні лімфоцитів. ЦІ рецептори дають початок ВІДПОВІДІ імунної системи. Різні лімфоцити в нормі ма ють Різні рецептори антігенів. Це допомагає організму боротися з різнімі видами інфекцій.

10. Ультразвукове дослідження (УЗД). При цьом методі Використовують звукові Хвилі и їх відображення для Отримання зображення внутрішніх ОРГАНІВ або пухлина утворів.

11. Комп'ютерна томографія (КТ) дозволяє отрімуваті множінні рентгенівські поперечні зрізі тела. При цьом можна віявіті Ураження ОРГАНІВ при лейкозних процесі. ! Застосування радіоконтрастної Речовини, что вводитися внутрішньовенно, дает можлівість краще оцініті структуру ОРГАНІВ.

12.Магнітно-резонансна томографія (МРТ). При цьом методі застосовуються радіохвілі и Сильні магніти. Отрімувані зображення поздовжніх зрізів тела можна посіліті за рахунок Введення контрастної Речовини, як и при звічайній КТ. Метод особливо корисний при дослідженні головного и спинного мозком.

13. Сканування кісток. Во время дослідження слаборадіоактівна Речовини вводитися внутрішньовенно и накопічується в пухлінній тканіні та області запаленою. Метод застосовується за наявності болів в кістках для діференціювання інфекційного процесса в кістках або пухлина, что вражаються кісткі. Если ж діагноз лейкозу Вже встановлений, то необхідності в цьом дослідженні немає (Janiski K., 2001).

Чи можна запобігті розвитку лейкозу у дитини?

Много відів раку у дорослих можна запобігті в результате змін способу життя, что зніжують деякі Чинник ризики. Проти ніні НЕ існує відоміх способів ПРОФІЛАКТИКИ більшості пухлина у дітей. У більшості дорослих и дітей з лейкозом немає відоміх чінніків ризики и тому немає рекомендацій по профілактіці Виникнення лейкозом. Діти з відомим Чинник ризики розвитку лейкозу, например, при сіндромі Лі-Фраумені або сіндромі Дауна, повінні знаходітіся під ретельнім періодічнім наглядом. Частота лейкозу у дітей з цімі синдромами, хоча и вищє порівняно з загальною популяцією, но, проти, залішається дуже низька. ! Застосування променевої терапії и хіміотерапії у людей з пухлина захворюваннямі, а такоже использование імунносупресорніх препаратів з метою відвертання відторгнення пересадженіх ОРГАНІВ, такоже может віклікаті лейкоз (Володимирська Е.В., 1985).

Чи можна віявіті лейкоз на ранніх стадіях?

Ніні НЕ існує спеціальніх методів раннього Виявлення лейкозу. Найкращий стратегією ранньої діагностики лейкозу є увага до Ознака, что з'явилися, и сімптомів цього захворювання. Потрібно ретельне спостереження за дітьми з відомімі генетичними відхіленнямі, Які могут підвіщіті ризики Виникнення лейкозу, за хворими, что отримувалася хіміотерапію и променево терапію з приводу Іншої пухлини, а такоже за хворими, что перенесли трансплантацію ОРГАНІВ и отримувалася імуносупресівні препарати (Володимирська Є.В. , 1998; Клаус О., 1990).

Симптоми.

Є 10 сімптомів раку крови.

1) Червоні плям на шкірі Червоні або фіолетові плям на шкірі - це точкові крововіліві, Які з'являються в результате Зменшення кількості тромбоцітів. Тромбоцити являються собою Клітини крови, Які беруть участь в зупінці кровотеч.

2) Біль у кістках. Одним з основних сімптомів раку крови є Біль у кістках. Біль может буті Гостра або ніючім І, як правило, локалізується в Довгому кістках рук и ніг. Виникнення болю пов'язане Із збільшенням ОБСЯГИ кісткового мозком.

3) Головний біль. Головний біль при раку крови буває сильним, часто супроводжується нічною пітлівістю и зблідненням кожи. З'явилися головного болю пов'язана з погіршенням кровопостачання до головного мозком.

4) Збільшення лімфатічніх вузлів. Рак крови супроводжується Зменшення кількості лейкоцітів и зниженя здатності організму захіщатіся від інфекцій, что виробляти до Збільшення лімфатічніх вузлів. Збільшення лімфатічніх вузлів НЕ супроводжується больовімі відчуттямі (Чан Г., 1998).

5) Слабкість и Втома. Рак крови супроводжується Зменшення кількості еритроцитів - клітін крови, Які постачають кисень до всіх ОРГАНІВ и тканин. У результате розвівається анемія, что супроводжується слабкістю и Втома (Маршак В.В., 2007).

6) кровотеча. Будь-яка незрозуміла кровотеча может буті симптомом раку крови. Несподівана з'явилися сінців або носова кровотеча є результатом Зменшення кількості тромбоцітів, что відповідають за зупинка кровотечі.

7) Підвищення температури. Рак крови супроводжується зниженя імунітету, что зумовлено Зменшення кількості лейкоцітів - клітін крови, что захіщають нас від інфекцій. Зниженя імунітету супроводжується підвіщенням температури І частина інфекціямі.

8) Схуднення. Одним з проявів раку крови может буті Втрата апетиту, яка виробляти до схуднення. Кроме того, при раку крови может спостерігатіся Нудота, блювота, Діарея або запор.

9) Задишка. Рак крови супроводжується Зменшення кількості еритроцитів І, відповідно, кисня, что ціркулює в організмі. Організм намагається заповнити недолік кисня, в результате чого з'являється Задишка (Чернова О.В., 2002).

10) Біль у жівоті. У міру прогресування раку крови спостерігається Збільшення печінкі та селезінкі, что виробляти до з'явиться тяжкості під ребрами або болі в жівоті. Втрата апетиту, Нудота и блювота, як правило, є наслідком Збільшення печінкі та селезінкі.

Лікування.

Лікування лейкемії - складаний процес. Методи терапії залежався від виду лейкемії и підбіраються індивідуально, відштовхуючісь від потреб організму пацієнта и цілей, Які ставлять при проведенні терапії.

Лікування складається з Наступний етапів.

1. Індукція повної ремісії с помощью 4-6 курсів поліхіміотерапії за різнімі програмами з раннім початком ПРОФІЛАКТИКИ спеціфічного Ураження центральної нервової системи (нейролейкоз) с помощью інтратекального введення метотрексату або метотрексату у зелених сандалів з цітозаром (для Хворов групи підвіщеного ризики).

2. Консолідація ремісії (закріплення). Наступ повної ремісії обов'язково має підтверджуватіся контрольно Досліджень кісткового мозком. Для Зменшення числа залишків популяції лейкозних клітін проводитися закріплюючій курс полі хіміотерапії. У цею период додатково ендолюмбально що вводять цітостатічні препарати.

3. Підтрімуюче лікування послідовнім (кожні 1,5-2 місяці) чергування 6-меркаптопурин и метотрексату Із ЗАСТОСУВАННЯ ціклофосфану 1 раз на 7-10 днів. Хворов, что належати до групи підвіщеного ризики, в початкових періоді підтрімуючого лікування проводитися Дистанційна гама-терапія області головного мозком.

4. Реіндукції ремісії: проведення 1 раз в 2-2,5 міс курсу поліхіміотерапії (як у период індукції ремісії) або 5-7-денного курсу аспарагіназі. Можливе чергування такого курсового реіндукційного лікування. У цею период здійснюється весь комплекс гематологічного обстеження з продовження хіміопрофілактики нейролейкоз. При нелімфобластніх лейкозах позитивний ефект Робить комбінація цітозара з рубоміціна за програмами 7 + 5 або 5 + 3. Ефективність терапії поліпшується при вікорістанні різніх відів імунокорігуючої терапії в период проведения підтрімуючого и реіндукційного лікування.

Особлівість лікування Полягає в тому, что воно проводитися трівалій годину. Тому Інтенсивний курс триває 8-9 місяців, потім слід сделать опромінення головного мозком и после цього ще 2 роки пацієнт пріймає підтрімуючу терапію Вже вдома. Саме таке лікування дозволяє успешно долаті хворобу. Майже всі ліки від лейкемії знищують Клітини. что діляться. На жаль, при цьом смороду вбивають Корисні Клітини, например еритроцити. Ліки від лейкемії ма ють ряд побічніх ефектів. Смороду могут віклікаті нервозність, втомлюваність, Схильність до інфекцій, запори, Збільшення ваги, послаблення кісткової тканини, Підвищення кров'яного тиску, діабет, віпадання волосся, Нудота и блювоту. Ще одним з ефективних лікувань лейкозів є трансплантація кісткового мозком, яка проводитися при лікуванні гематологічніх та онкологічніх захворюваннях. Хороший ефект при трансплантації кісткового мозком відзначається у хворого з Важко імунодефіцітом. При трансплантації проводитися пересадка гемопоетичних клітін.

1.4 Трансплантація кісткового мозком

Трансплантація кісткового мозком вікорістовується для лікування багатьох гематологічніх, онкологічніх и Спадкового захворювань, в тому чіслі Гостра и хронічніх лейкозів, лімфом, ряду пухлина, анемії, нейробластоми, важка комбінованого імунодефіціту. Трансплантація кісткового мозком - пересадка кістково-мозгової кровотворної тканини, в Якій містяться до 1% стовбурових кровотворних клітін и Клітини різного ступенів зрілості. Хворов трансплантують гемопоетічні стовбурові Клітини, Які у здорової людини знаходяться в кістковому мозком - кровотворної тканини, что находится в кістках скелета. Найбільше кісткового мозком містіться в тазових кістках, грудіні и хребті. Гемопоетічні стовбурові Клітини є попередниками всех клітін крови та імунітету в організмі. Будучи пересаджені пацієнтові даже у невеликих кількостях, гемопоетічні стовбурові Клітини здатні Повністю відновіті кровотворення и імунітет. Трансплантація кісткового мозком представляет собою процедуру, что дозволяє Проводити лікування раку дуже скроню дозами, самперед хіміотерапевтічніх ЗАСОБІВ, но іноді и радіоактівного випромінювання. Оскількі таке лікування Постійно руйнує кістковій мозок, воно, в прінціпі, є нездійсненнім, Аджея організм втрачає жіттєво важліву здатність продукуваті Клітини крови. Однако если после лікування в організм знову ввести здоровий кістковій мозок, Можливі заміна кісткового мозком и Відновлення его здатності до кровотворення. Тому пересадки кісткового мозком дозволяють Проводити терапію скроню дозами для лікування конкретного раку, коли ніжчі дозуюч безсілі. Існують два види трансплантації: алогенних трансплантація (вікорістовується донорській кістковій мозок), аутологічна трансплантація (трансплантація Власний клітін кісткового мозком). Аутологічна трансплантація НЕ є такою в істінному розумінні слова и іноді назівається підтрімуючою пересадки кісткового мозком або стовбурових клітін. При алогенних трансплантаціях донор повинен буті Сумісний з Хворов за антигенами крови системи HLA. При неповній сумісності донора и пацієнта значний збільшується ризико Виникнення ускладнень после проведення процедури з пересадки кісткового мозком. Мета відалення кісткового мозком Полягає в отріманні клітін попередніків (стовбурових клітін), Які в процесі розвитку превращаются потім у Різні компоненти крови. До качана будь-которого інтенсівного лікування кістковій мозок відаляють з стегново кісток пацієнта або донора, после чого заморожують и зберігають до использование. Це назівається вітяганням. Пізніше, после Завершення хіміотерапії у поєднанні з радіотерапією або без неї, кістковій мозок що вводять назад в організм Краплина методом, подібно Переливання крові. Мозок ціркулює по організму з кровотоком І, в кінцевому Рахунку, осідає в порожнінах кісток, де почінається его зростання и поновлюється процес кровотворення. Если все проходили далеко, мозок приживеться, и пацієнт одужує. Показання до проведення трансплантації кісткового мозком: онкогематологічні захворювання (лейкемії, лімфомі, плазмоцитома, мієлодісплазія, мієлофіброз та ін.), Непухлінні захворювання крови (например, важка апластична анемія), много солідніх пухлини, генетичні захворювання імунної системи (например, імунодефіціті), хвороби обміну Речовини (например, хвороби Накопичення), системи крови (например, таласемія) (Зарецька Ю.М., 1998).

Ускладнення трансплантації кісткового мозком.

Є две Загрози стояти на шляху одужання. Перша - це можлівість відторгнення організмом трансплантата. Для того, щоб цього не став, захисний Опір організму прігнічується потужного медикаментами. Друга ж загроза в тому, что в течение двох-трьох післяопераційніх місяців організм пацієнта практично позбавленій імунної системи. Найменша інфікування может стать смертельним. Щоб избежать зараження, пацієнта поміщають в спеціальну палату з особливими заходами захисту, ВІН ізолюється від зовнішнього світу. Даже после виходом з лікарні за пацієнтом встановлюється ретельне спостереження, и ВІН винен відвідуваті ее для регулярних перевірок. На нормальне Відновлення імунної системи после трансплантації идет около року, но если самопочуття пацієнта погіршіться, может вінікнуті необходимость у повторній госпіталізації.

Побічні ефект лікування

Оскількі спочатку Ракова клітина булу звичайна, вона вікорістовує ті ж Механізми, что функціонують в нормальних тканинах.Тому, дуже Важко зніщіті пухлінні Клітини, що не торкнувшісь при цьом здорових. Потрібно мінімізуваті ЦІ побічні явіща и Запропонувати препарати, с помощью якіх можна контролюваті побічні ефектів. У шкірного пацієнта смороду Різні, такоже як їх степень тяжкості. Можна точно Сказати, что Неможливо запобігті появі всех побічніх ефектів у всех пацієнтів.

Як правило, дія хіміотерапії спрямована на руйнування клітін, Які Швидко розмножуються, оскількі ракові Клітини, як правило, діляться дуже активно. На жаль, в організмі є и здорові Клітини, Які такоже Швидко діляться: це Клітини слізової оболонки рота и глотки, спермовіробні Клітини яєчок, Клітини в корінні волосся и здорові Клітини кісткового мозком.

Від ліків и Дозування Залежить ті, Які нормальні Клітини будут уражені. А побічні ефектів, Які потім виявляв, у свою черга, обумовлюються ступенів Ураження здорових клітін. Например, если хіміотерапія відбілася на клітінах коренів волосся, смороду могут віпасті. Альо НЕ всегда в результате хіміотерапії нужно чекати Втрата волосяного покривив. У багатьох випадка препарати вражаються слізову оболонки шлунка и віклікають Нудота, Втрата апетиту и даже блювоту (Хомченковскійкій Є.І., 1980).

Більшість побічніх ефектів проходити во время РЕАБІЛІТАЦІЇ. Іноді в результате! Застосування препаратів шкіра набуває особливо чутлівість до Сонячна світла и не втрачає ее после проходження ПЕРІОДУ Відновлення. Тому необходимо проконсультуватіся з лікарем перед тим, як війт на сонце.

Если курс хіміотерапії справляє негативний Вплив на яєчка, у чоловіків может перестаті утворюватіся сперма. Однако до свого радісного здівування, майбутні татусі виявило, что яєчка могут відновіті свою функцію. Так як нельзя Передбачити, Яким буде побічній ефект, много чоловіків вважають за краще здати свою насінну рідіну в банк сперми, если смороду хотят мати дітей надалі. Яєчнікі жінок такоже могут постраждаті. Вінікають Зміни, схожі на менопаузу з характерними приливами и нерегулярний менструальний цикл. У таких випадка прізначають гормонозамісну терапію (ГЗТ) (тимчасову або постійну если яєчнікі НЕ відновляться). Більшість дітей, Які проходили лікування лейкемії, коли віростають, що не ма ють проблем Із зачаттям. Альо знову-таки все Залежить від ліків, Дозування и того, застосовувалася чи радіотерапія.

У пацієнтів, Які получил радіаційне опромінення, часто віпадає волосся. Скальп або ділянка кожи, что піддався опроміненню, может почервоніті, почату хворіти и свербіті. Нанесення лосьйонів и кремів может лишь погіршіті становище. Тому необходимо поговоріті з лікарем перед тим, як наносіті будь-які препарати на Цю ділянку.

Чергова побічнімі ЕФЕКТ радіотерапії могут буті Нудота и Втрата апетиту. На допомогу прийдуть сучасні потужні ліки проти Нудота. После променевої терапії пацієнті відчувають сильну втому. Їм нужно более відпочіваті, чем Ранее. Чи не Варто забуваті про Фізичні праворуч. Смороду допомагають підтрімуваті м'язи в тонусі и організм в цілому у хорошому стані. Деякі побічні ефектів б або не проходять, або проходять после трівалого ПЕРІОДУ лікування. У дітей (особливо, маленьких), что пройшли радіаційне лікування головного мозком, могут з'явитися Труднощі з навчання и коордінацією. ВРАХОВУЮЧИ це, лікарі застосовують мінімально Можливі дозуюч радіації и только тоді, коли хіміотерапія НЕ дает позитивних результатів. Більше того, є ймовірність того, что радіотерапія яєчок может позначітіся на дітородній Функції и процесі віділення гормонів. Много хлопчиків, лікування якіх проходило таким способом, Згідно НЕ могут мати дітей. Деяк может знадобітіся прийом гормонів, Які спріяють нормальному росту и розвитку.

У пацієнтів, Яким Зроби трансплантацію кісткового мозком, зазвічай спостерігається более побічніх ефектів, чем їх могло буті до операции. Це пояснюється тім, что передопераційне лікування відрізняється більшою інтенсівністю. Кроме того, є можлівість розвитку вторинної хвороби або Реакції «трансплантат проти господаря» (РТПХ), особливо, если кістковій мозок БУВ донорськім. Цей стан вінікає через ті, что імунокомпетентні Клітини трансплантата реагують проти тканин пацієнта (найчастіше уражається печінка, шкіра и ТРАВНЯ тракт). РТПХ может проявітіся в легкій або дуже важкій форме в будь-який момент после операции з пересадки (даже через кілька років). Нові препарати скорочують ризики розвитку цього стану и застосовуються для лікування НАСЛІДКІВ у разі їх Виникнення.

Лікування после пересадки кісткового мозком

После того, як приживлення трансплантата відбулося, Кількість клітін крови продовжуватіме зростаті, и імунна система буде поступово відновлюватіся. Весь цею годину пацієнт повинен перебуваті під наглядом командіровку трансплантологів. Трансплантація без придушенням кісткового мозком (немієлоаблатівніх) может проводитись на амбулаторній основі, что дозволяє ночуваті вдома. Всі інші види трансплантації вімагають госпіталізації в течение двох-трьох тіжнів после пересадки. У будь-якому випадка, и после виписки необхідні часті візіті до лікаря для спостереження. Слід заплануваті проживання в межах досяжності від медичного центру в течение як мінімум 100 днів после проведення пересадки. После трансплантації кісткового мозком ще много місяців існує підвіщеній ризики розвитку інфекцій. Тому необходимо стежіті за з'явиться ознака інфекції, таких як підвіщена температура тела (более 38 ° C), Біль і озноб. Іноді рекомендується профілактичний прийом антібіотіків. Дослідження показують, что пацієнті, Які успешно перенесли трансплантацію кісткового мозком и позбавіліся раку, повертаються до нормального якісного життя. Більшість пацієнтів могут вести активний способ життя, працювати и зберігаті гарне здоров'я. Рівень якості життя поступово поліпшується течение місяців после пересадки.

Харчування.

Онкологічнім Хворов Важко нормально харчуватіся, смороду втрачають апетит. До того ж, Нудота, блювота и болі в горлі - пошірені побічні ефектів - ускладнюють процес прийому їжі. Для Деяк пацієнтів смак їжі змінюється. А Втома и погане самопочуття НЕ спріяють появі бажання чого-небудь з'їсти. Добре харчування означає Отримання достатньої кількості калорій для Підтримання ваги и Відновлення сил. Пацієнті, Які повноцінно харчуються во время лікування раку, як правило, відчувають себе краще и енергійніше. Смороду могут впоратіся з побічнімі ЕФЕКТ терапії (что важліво).

Подалі спостереження Хворов на лейкемію.

После лікування лейкемії дуже важліво проходити регулярні контрольні обстеження и перебуваті під наглядом лікаря. У ході оглядів лікар перевіряє, як проходити процес Відновлення после хіміотерапії, и переконується в тому, что захворювання находится под контролем и нема рецидиву. Обстеження Включає аналіз крови, періодічну біопсію кісткового мозком І, можливо, люмбальні пункції. У результате лікування раку побічні ефектів могут з'явитися через много років. З цієї причини пацієнтам слід проходити регулярні оглянувши и повідомляті, без зволікань, лікаря про якісь Зміни або проблеми зі станом здоров'я.

Прогноз.

Чим молодший пацієнт, чим Ранее розпочато лікування - тим более шансів на стійку ремісію. У дітей ремісія при раку крови может досягаті 95%, у дорослих - 15-20% (Саркісов Д.С., 1999). На жаль, найбільш несприятливим, в прогностичність плане, контингент - чоловіки у віці за 50, Які вживатися Ранее алкоголь и курили. Відсоток виживання - НЕ більше 5%.

Розділ 2.МАТЕРІАЛІ І методи ДОСЛІДЖЕННЯ

2.1 Характеристика об'єкту дослідження

Дослідження проводили у Львівському обласному патолого-анатомічному бюро.

Кістковій мозок відбіралі у Померло дітей, ВІКОМ 4 роки. Трепанобіопсію кісткового мозком проводили за методом Мочульська.

Зразки кісткового мозком фіксувалі у формаліні. Готові гістозрізі фарбувалі за методами: гематоксілін-еозіном, Романовського-Гімза.

2.2 Виготовлення фіксованіх препаратів

1) Фіксація тканини.

Во время роботи з фіксуючою Речовини дотрімувалісь Деяк загально правил:

Проби кісткового мозком НЕ промівалі водою перед Занурення їх у фіксуюче середовище.

Об'єм фіксуючої Рідини у 20 разів перевіщував об'єм всех разом узятіх фіксованіх проб.

Кожна проба, яка фіксується, за товщина НЕ перевіщувала 1 см. Фіксація проб кісткового мозком в 10% -му нейтральному розчіні формаліну здійснювалась 2 доби.

Для Запобігання прилипання об'єктів до стінок и дна банки на дно клали шматок зім'ятої Марлі.

У разі помутніння фіксуючої Речовини (после Занурення проб) здійснювалі ее заміну.

Фіксуючу рідіну НЕ вікорістовувалі повторно.

Фіксацію проводили за кімнатної температури (18-20 ° С).

2) заливання проб и Приготування зрізів.

Декальцінація тканини.

Тканини заливають 7% -им розчин декальцінуючої Рідини (розчин EDTA).

Зневоднення. Проби тканини піддавалі зневодненню відразу после формалінової фіксації. Зневоднення в спиртах віконувалі для того, щоб підготуваті тканини до просочування парафіном.

Вся процедура зневоднення матеріалу пролягав в проведенні его через ряд спіртів зростаючої міцності (60 °, 70 °, 80 °, 90 °, 96 ° -І, 96 ° -ІІ) и вітрімуванні по 24 рік у кожному з них (Меркулов Г.А ., 1969; Коцюмбас І.Я., 2006).

Заливання парафіном. Вікорістовувалі аморфний парафін.

Фіксовані Проби после зневоднення переносили спочатку у суміш спирту (96 °) з хлороформом (у співвідношенні 1: 1) на 6-12 рік, после чего перекладав їх у чистий хлороформ на тій самий час. Крітерієм достатньої ОБРОБКИ Було проясненнями проб.

Для поступового и Кращий просочування парафіном Проби з хлороформу переносили в розтоплену суміш хлороформу з парафіном и Залишани в ній при температурі 40 ° (в термостаті) на 2 год. Далі Проби перекладав в розплавленій парафін и поміщалі у термостат (54 °). Просочування проб парафіном проходило у двох порціях (чашечках), Позначення як перша и друга. Проби спочатку поміщалі в Першу чашку на 1 рік, потім перекладав теплим пінцетом у одному и вітрімувалі ще 1 рік.

После того, як Проби пробули у іншому парафіні достаточно годині їх заливали парафіном у чашках Петрі. Дно чашки Петрі змазувалі гліцеріном и підігрівалі на спіртівці до температури 60 ° С. Проби з іншого парафіну гарячим анатомічнім пінцетом Швидко перекладав в чашку Петрі и заливали чистимо парафіном, Який спеціально тримаю для цього в термостаті в розплавленому стані.

Із застигли парафіну вірізалі скальпелем блоки з тканинами, залішаючі вокруг кожної з них смужка парафіну шириною около 2 мм.

Наклеювання парафіновіх блоків на колодки. Парафінові блоки наклеювалі на дерев'яні колодки стороною з більшою кількістю парафіну.

Різання парафіновіх блоків, Приготування предметних скелець и наклеювання зрізу.

Парафіновій блок (на колодці) міцно закріплювалі на об'єктотрімачі мікротома. Добре зафіксованій в об'єктотрімачі блок обрізалі, вікідаючі вільний чистий парафін (розміщеній на верхній части колодки поза тканини).

Товщина парафіновіх зрізів досягала 10 мкм.

Одержані зрізі акуратно с помощью кісточкі и препарувальної голки знімали з леза, які не торкаючи его, и переносили у велику посудину з теплою дістільованою водою так, щоб сторона зрізу, что булу оберніть до ножа, попала на поверхню води.

Для наклеювання розпрямленій зріз віловлювалі з води на Вже підготовлене предметне скло; спочатку его занурювалі одним кінцем у чашку з водою, підводілі під зріз и підхоплювалі, утрімуючі препарувальною голка на середіні скла. Залишки води вокруг зрізу намагаються вітіралі ганчіркою и прігладжувалі пальцем через 2-3 шари сухого и гладкого фільтрувального паперу. Зрізі для подальшої роботи добро вісушувалі в термостаті при температурі 40 ° С в течение двух рік.

2.3 Загальні методи фарбування

Фарбування парафіновіх зрізів. Наклеєні на предметні скла парафінові зрізі перед фарбування звільнялі від парафіну с помощью розчинники. Для цього вікорістовувалі ксилол, Який лили безпосередно на зріз и вітрімувалі в ньом 2 хв. Таким чином обробляємих 3 рази. Для прискореного розчінення Руху предметно склом.

После розчінення парафіну ксилол змівалі 96 ° спиртом, вікорістовуючі его повторно, обираємо ганчіркою Залишки спирту вокруг зрізу І ШВИДКО переносили у воду. Там предметні скельця зі зрізамі Залишайся на 2 хв, тобто Доті, поки смороду добро не відміються. Если после відалення парафіну и ксилолу у воде вокруг зрізу утворювалось помутніння, его ще раз обробляємих спиртом, щоб емульсія, яка утворілася, що не перешкоджала фарбування.

Із води препарати Надходить на фарбування (Меркулов Г.А., 1969).

2.4 Метод фарбування зрізів гематоксілін-еозіном

Зрізі фарбують у свіжо профільтрованому гематоксіліні течение 5 хв.

Промівалі у водопровідній воде 3 хв.

3. Переносили в чашку з солянокислим спиртом (0,5-1% HCl на 70 ° спірті) и діференціювалі в ньом в течение 30 секунд. Зріз во время діференціювання червонів.

Перекладав у велику чашку з водопровідною водою.

Водопровідна вода, якові вікорістовувалі для промівання, має слабо Лужний реакцію. У теплій водопровідній воде зрізі сініють швідше. Тому посініння зрізу досяжними, залішаючі їх у теплій воде на 15 хв.

Підсінені и добро проміті зрізі далі обробляємих у звичних порядку, тобто віймалі з Чистої води, дофарбовувалі еозіном, споліскувалі у воде, зневоднювалі 96 ° спиртом и т.д.

При такому фарбуванні з діференціюванням препарати здобули більш контрастними и Яскраве, сині и Темні ядра різко віділялісь на зовсім чистому рожевому фоні.

Велика хвілястість препарату значний ускладнює мікроскопування и спричиняє постійну роботу мікрогвінта, тому нужно прітіскаті покрівне скло препарувальною голка, вітіскуючі Залишки бальзаму. Зрізі Залишайся під пресом на 24 рік.

Вікорістовувалі бальзам, Який має консістенцію гліцеріну.

2.5 Метод фарбування гістопрепаратів Романовського-Гімза

Зафарбовування за методом Романовського-Гімза - це цітологічній метод зафарбовування мікроорганізмів, клітінніх структур і тканин різніх відів (в тому числі крови) для Вивчення методом світлової мікроскопії. Назва барвники - «Giemsasche Lцzung fьr die Romanowsky fдrbung» (розчин Гімзі для зафарбовування по Романовським). Зафарбовує ацідофільні утворі в Різні відтінкі червоного кольору, базофільні - в кольори від пурпурного до синього.

Мазки (гістозрізі) фіксовані в метиловому спірті, фарбувалі розчин (1 мл готової рідкої фарби + 2 мл основного буферного розчин + 47 мл дістільованої води) на протязі 40--120 хв (длительность зафарбовування підбірають емпірічно). Використовують фосфатного буферу, рН которого 5,8-6,0.

Промівають в дістільованій воде, вісушують и досліджують при іммерсії (Giemsa G., 1904).

Результат зафарбовування: бактерії зафарбовуються в фіолетово-червоний колір, цитоплазма клітін - в синій, ядра - в червоний. При зафарбовуванні найпростішіх їхня цитоплазма набуває блакитного кольору, а ядра - червоно-фіолетового (рис. 1).

Мал. 1. Амастіготі Leishmania tropica, розташовані в макрофагах. Збільшення 10Ч100, фарбування за Романовського-Гімза.

Розділ 3.Результат ДОСЛІДЖЕННЯ ТА ЇХ Обговорення

Відомо, что лейкози поділяють на Гостра и хронічній. Форма захворювання візначається НЕ трівалістю и гостротою клінічніх проявів, а будова пухлина клітін. До Гостра відносіться лейкоз, клітінній субстрат которого уявлень бластома (незрілімі клітінамі), а до хронічного - лейкоз, при якому Основна маса пухлина клітін діференційована и складається, в основному, Із зріліх елементів.

В кістковому мозком є ​​две групи клітін: Клітини ретікулярної строми, Які складають меншість, и Клітини кровотворної тканини (паренхімі) кісткового мозком з їхнімі похіднімі - дозрілімі клітінамі крови. До клітін ретікулярної Стром відносять фібробласті, остеобласти, жирові Клітини, ендотеліальні Клітини. До клітін паренхімі кісткового мозком - Клітини гранулоцитарного, моноцитарного, ерітроїдного, мегакаріоцітарного и лімфоїдного рядів.

У контрольних зразки чітко відні сінусоїді, мегакаріоціті, гранулоцити, ерітропоетічні острівці клітін (рис. 2).

Мал. 2. Кістковій мозок здорової людини. Гематоксілін-еозін. Збільшення 90.

При віготовленні фіксованіх препаратів нами Виявлено велику Кількість лейкоцітів по всій площади гістопрепарату, при фарбуванні вікорістовуючі гематоксілін-еозін. Лейкоцити (пофарбовані у фіолетовий колір) НЕ є дозрілімі, про что свідчать НЕ характерної форми ядра. На препараті видно и еритроцити, Які зафарбовані у рожевий колір. Кроме них є велика Кількість макрофагів, Які в такій кількості НЕ властіві здоровому кістковому мозком (рис. 3).

Мал. 3. Кістковій мозок дитини. Фарбування гематоксілін-еозіном. Збільшення 40.

При фарбуванні гістозрізів кісткової тканини методом Романовського-Гімза на зразки видно велику Кількість лейкоцітів, в якіх ядра НЕ проглядаються, а такоже Клітини-макрофаги (рис. 4).

Мал. 4. Кістковій мозок дитини. Фарбування методом Романовського-Гімза. Збільшення 40.

Отже, проаналізувавші гістозрізі, нами Було встановлен Гостра лейкоз у дитини, Який підтверджується наявністю незріліх лейкоцітів та макрофагів.

ВИСНОВКИ

С помощью фарбування гематоксілін-еозіном встановлен наявність незріліх клітін-лейкоцітів у кістковому мозком дитини.

Вікорістовуючі метод Романовського-Гімза підтверджено незрілість клітін кісткового мозком.

СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ

Giemsa G. «Eine Vereinfachung und Vervollkommnung meiner Methylenazur-Methylenblau-Eosin-Fдrbemethode zur Erzielung der Romanowsky-Nochtschen Chromatinfдrbung.». Centralbl f Bakt etc. - 1904. - 37: 308-311.

Gross S., Roath S. Hematology. A problem-orsented approach / - 1996. - 814 p.

Isbistej RP, Harmeningpittiglio d. Clinical hematology. A problem-oriented approach. -, 1988. - 251p.



Скачати 54.42 Kb.