Діагностика кашлюку і паракоклюшная інфекцій






    Головна сторінка





Скачати 54.25 Kb.
Дата конвертації10.09.2018
Розмір54.25 Kb.
Типдипломна робота

МІНІСТЕРСТВО ОХОРОНИ ЗДОРОВ'Я І НАУКИ УКРАЇНИ

Установа освіти «Гомельський державний медичний університет»

Медико-діагностичний факультет Кафедра інфекційних хвороб

Дипломна робота

Діагностика кашлюку і паракоклюшная інфекцій

Виконавець: Десятникова Е.Н.

Перший керівник: Красенів Е.Л.

Гомель, 2010 року.

РЕФЕРАТ

Дипломна робота

Перелік ключових слів: коклюш, паракоклюш, B. pertussis, B. parapertussis, епідеміологія, лабораторна діагностика.

Об'єкт дослідження: 64 пацієнта, які перебували на лікуванні в Гомельській обласній інфекційній клінічній лікарні з 2005 року по 2009 рік.

Мета роботи: визначити значимість бактеріологічних і серологічних методів діагностики.

Область застосування: інфекційні хвороби, педіатрія, лабораторна діагностика.

Коклюш залишається актуальною інфекцією в усьому світі, в тому числі в країнах з високим рівнем імунізації. У той же час до цих пір відсутні високочутливі, специфічні і легко відтворювані методи діагностики цієї інфекції, які б задовольняли потреби практичної охорони здоров'я.

Представлений огляд даних по мікробіологічної характеристиці збудника коклюшу і паракашлюку. Описано різні фактори патогенності Bardetella pertussis, їх роль в розвитку захворювання і формуванні імунітету людини. Розглянуто деякі питання патогенезу і клінічної картини коклюшу. Описуються різні методи лабораторної діагностики інфекції, викликаної Bardetella pertussis, їх переваги та недоліки. Для підтвердження діагнозу враховують клінічну картину, прямі методи виявлення збудника захворювання і серологічні методи діагностики. У лабораторії ГОІКБ застосовують посів на коклюш і реакцію аглютинації для визначення титру антитіл.

В результаті роботи була проведена обробка результатів досліджень, отриманих у інфекційних хворих.

ЗМІСТ

Перелік умовних позначень

Вступ

Глава 1. Огляд літератури

1.1 Етіологія збудників кашлюку та паракоклюшная інфекцій

1.2 Патогенез

1.3 Клінічна картина

1.4 Лабораторна діагностика

1.4.1 Загальний аналіз крові

1.4.2 Мікробіологічні методи лабораторної діагностики

1.4.3 Імунофлюоресцентний метод

1.4.4 Полімеразна ланцюгова реакція

1.4.5 блотом -ELISA

1.4.6 Серологічні методи діагностики

1.5 Особливості серологічної діагностики у щеплених

Глава 2. Об'єкт і методи дослідження

2.1 Методика проведення бактеріологічного дослідження

2.2 Методика проведення РА

2.3 Методи статистичного аналізу

2.4 Характеристика обстежених хворих

Глава 3. Результати власних досліджень

3.1 Характеристика хворих в групі щеплених

3.2 Характеристика хворих в групі щеплених

3.3 Порівняльна характеристика щеплених і не щеплених

3.4 Значення бактеріологічного і серологічних методів дослідження

висновок

Список літератури

ПЕРЕЛІК УМОВНИХ ПОЗНАЧЕНЬ

АГГ - агглютиноген

ГОІКБ - Гомельська обласна інфекційна клінічна лікарня

ОАК - загальний аналіз крові

ІФА - імуноферментний аналіз

КТ - коклюшний токсин

КУА - казеїново - вугільний агар

ПЛР - полімеразна ланцюгова реакція

РА - реакція аглютинації

СНТ - клітини яєчників китайських хом'яків

IL- інтерлейкін

ВСТУП

Коклюш і паракоклюш є високо контагіозними бактеріальними інфекціями респіраторного тракту. Збудники захворювань - грамнегативнібактерії Bordetella pertussis та Bordetella parapertussis. B. parapertussis викликає близько 5% всіх випадків коклюшу, точніше паракоклюш - захворювання, що протікає в атипової, легшій формі. У щеплених людей, які не хворіли на раніше, індекс сприйнятливості досягає 0,7 - 0,75, тобто з 100 чоловік, які почали тісний контакт з хворим, захворює 70 - 75 [1].

Джерелом інфекції є в основному хвора людина, яка виділяє збудника протягом 4-6 тижнів хвороби. Зараження може відбутися і від хворого стертою формою, а також від здорових людей, що стали тимчасовими носіями внаслідок контакту з хворим на кашлюк. Біотопом збудника є верхні дихальні шляхи хворого. Передача збудника відбувається повітряно-крапельним шляхом. Коклюш відноситься до ендемічних захворювань, проте кожні 3-5 років трапляються епідемії. Кількість випадків коклюшу серйозно скоротилося внаслідок масової вакцинації, проте, навіть в країнах з великим охопленням вакцинації регулярно трапляються сплески захворювання.

Через 10-15 років після вакцинації імунітет слабшає, і людина знову стає вразливим по відношенню до коклюшу. На тлі масової імунізації у значної частини хворих осіб хвороба протікає безсимптомно або з мінімальними клінічними проявами, особливо у дітей 4-6 років, які не мають достатньо високий рівень поствакцинального імунітету. У подібних випадках захворювання протікає в більш м'якій формі, без прояву класичних клінічних стадій. Воно характеризується неспецифічним тривалим кашлем, триваючим протягом декількох тижнів і навіть місяців. Тому практично не діагностується коклюш у дорослих, що ймовірно, пов'язано не тільки зі стертою клінікою і з відсутністю лейкоцитозу, а й з традиційним ставленням лікарів до коклюшу як до виключно дитячої інфекції. Підлітки і дорослі пацієнти з не діагностованим кашлюк можуть служити джерелом інфекції для нещеплених дітей. Найбільш високий ризик важкого захворювання піддаються діти, які ще занадто малі для того, щоб отримати повну вакцинацію і ті, хто ще не завершив серію первинної вакцинації.

До теперішнього часу реєструється висока захворюваність на кашлюк, особливо серед дітей до року і 3-6 років. Зберігаються її періодичні та сезонні підйоми, хоча і з меншим ступенем інтенсивності. Як і раніше, кашлюк хворіють щеплені діти, частина з яких у відносно короткі терміни після щеплень. Збільшується число важких і середньо форм інфекції серед нещеплених дітей, а також втратили поствакцинальний імунітет.

Мета: Визначити значимість бактеріологічних і серологічних методів діагностики.

завдання:

1. Визначити статево-віковий склад хворих.

2. Визначити діагностичну значимість бактеріологічного методу дослідження.

3. Виявити особливості серологічної діагностики у щеплених.

Глава 1. Огляд літератури

1.1 Етіологія збудників кашлюку та паракоклюшная інфекцій

Збудник коклюшу - Вогdetella pertussis - і паракашлюку-Bordetella parapertussis відносяться до роду Воrdetella.

Бордетелли представляють дрібні (0,5-2,0 мк. Х 0,2-0,5 мк.) Грамнегативні коккобацілламі. В.pertussis маленька, нерухома, овоидной форми паличка розміром 0,3 - 0,5 мк. х 0,5 --1,0 мк. При фарбуванні толуїдиновим синім виявляються біполярно розташовані метахроматичні гранули. У палички коклюшу можна виявити також капсулу. В. рагареrtussis морфологічно подібна, але розміром трохи більше (0,6 - 2,0 мк).

Стійкість до фізичних і хімічних факторів.

Коклюшний мікроб - облігатний паразит, поза організмом він зберігається дуже недовго. У сухий мокроті - кілька годин; при температурі 50-55 ° С гине протягом 30 хв. Дуже чутливий до ультрафіолетового світла і хімічним антисептикам. Коклюшні і паракоклюшная мікроби (в меншій мірі) чутливі до антибіотиків [2].

Зростання і поживні потреби мікроорганізмів.

Бордетелли - строгі аероби, що використовують амінокислоти як джерело азоту, вуглецю та енергії. Вуглеводи, мабуть, використовують тільки бронхосептікозние мікроби. Солі амонію і двоокис вуглецю утворюються при біосинтезі з глутамату та інших амінокислот шляхом окисного дезамінування (бронхосептікозний мікроб може відновлювати нітрати).

Мікроби містять такі ферменти: глутамінсінтетазу, каталазу, супероксидний дисмутазу, пероксидазу, цитохроми А - 603, В - 560, C - 553, D-- 629 і про, а також блакитний протеїн-азурін. Паракоклюшная мікроб має уреазной активністю і утворює тирозиназу.

При використанні простого середовища певного складу було встановлено, що для коклюшного мікроба необхідні тільки дві амінокислоти. Однією повинна бути глутамінова кислота (або, по-видимому, глутамін) або пролін, а інший - цистин або цистеїн. Хоча глутамінова кислота як субстрат для росту явно краще, все ж кілька інших амінокислот також окислюються. Концентрація солей дуже впливає на зростання коклюшного мікроба.

Коклюшні бактерії - повільно зростаючі мікроорганізми, оптимальна температура росту 35 - 36 ° С. Деякі сполуки, що утворюються в середовищах під час автоклавування (колоїдна сірка або сульфіди з цестеін і агару, органічна пероксидаза) і в процесі росту (ненасичені жирні кислоти), і марганець в агарі перешкоджають зростанню коклюшного мікроба. Щоб усунути дію цих інгібіторів, використовують крохмаль, вугілля, аніонообмінні смоли, альбумін, кров 15% або більше (або еритроцити). Ватні пробки також містять летючі жирні кислоти. Їх дію можна виключити обробкою вати органічними розчинниками або використанням металевих кришок.

Для первинного виділення і культивування кашлюкових і паракоклюшная мікробів найбільш придатні середу Борде-Жангу і КУА. Як джерело амінокислот для останньої середи використовують казеїновий або квасолевий гідролізати.

Мікроби на щільних поживних середовищах утворюють гладкі, вологі, опуклі, рівні, блискучі колонії з перловим відтінком. Найдрібніші і повільно зростаючі колонії на КУА у В.реrtussis, їх розмір 1-2 мм, виростають за 48-72 години; колонії B.parapertussis ростуть швидше і після 24-48 годин колонії зазвичай в 1,5 рази більше в діаметрі, ніж коклюшні. Обидва мікроба і без листя. B.pertussis має низьку ферментативну активність (позитивний тест на оксидазу). В.parapertussis виробляє ферменти тирозинази і уреазу (негативний тест на оксидазу). Крім того, В.parapertussis менш вибаглива, росте на простому агарі, в той час як В.реrtussis потребує складних поживних середовищах [3].

Антигенна структура. Коклюшний мікроб за антигенними властивостями одноманітний, але відрізняється складністю антигенного будови - у нього вдається виявити до 12 антигенних компонентів. Коклюшний мікроб має власні видові антигени і спільні з паракоклюшная. Загальні антигени є як у обох видів (О-антиген), так і окремі з кожним з них. [14]. Бардетелли распологают 14 термолобільнимі капсульними (К) антигенами. Вони виявляються в реакції аглютинації і тому називаються «агглютиногенами». Їх часто називають факторами і позначають арабськими цифрами. Фактори 1-6 специфічні для B. pertussis. З них фактор 1 представлений у всіх штамів кашлюку палички і використовується як специфічний антигенний маркер (видоспецифічний антиген) цього виду бардетелл. Фактор 2 - 5 неоднаково представлені у різних штамів, дозволяючи диференціювати серологічні варіанти (серотипи) кашлюку палички. Фактор 14 специфічний для B. parapertussis. Переходячи в R-форму, бордетелли втрачають капсулу і не агглютинируют антифакторної (анти-К) сироватками [4].

Фактори патогенності.В даний час з В.реrtussis виділено і охарактеризовано кілька біологічно активних субстанцій, що визначають особливості взаємодії збудника з організмом господаря. Їх вивчення дозволило зрозуміти деякі особливості патогенезу і імунітету, що формується як після імунізації, так і після перенесеного захворювання.

Коклюшний токсин (КТ) - основний токсин В.реrtussis, володіє різною біологічною активністю: є лімфоцітозстімулірующім фактором (ЛСФ), гістамінсенсібілізірующім фактором (ГСФ), протективного антигеном (ПА), підвищує вироблення інсуліну. Він також є основним фактором патогенності В.реrtussis. КТ - екзотоксин, що складається з двох функціональних частин (А і В) і п'яти структурних субодиниць. Ділянка А (відповідає субодиниці S1) - володіє ферментативної активністю, каталізує АДФ-рібозілірованіе трансдуцін (білка мембрани клітини-мішені), який є частиною системи, інгібуючої клітинну аденилатциклазу. Порушення контролю функціонування аденілатциклази призводить до накопичення цАМФ, що порушує функцію епітеліальних клітин-мішеней.

Ділянка В (включає субодиниці S2-S5) відповідає за приєднання токсину з рецепторами епітеліальних клітин-мішеней.

З кашлюковим токсином пов'язують тяжкість захворювання і системні поразки. Однак, в ряді робіт вказується на присутність практично всіх ознак коклюшу у хворих паракоклюшем, збудник якого, як відомо, токсин не виробляє (відсутність продукції КГ В.раrapertussis для виключення поєднаної інфекції перевірялося в експерименті), єдина відмінність паракоклюшная інфекції від кашлюку - відсутність у хворих в крові лейкоцитозу.

Филаментозному гемаглютинін - високомолекулярний поверхневий білок, компонент клітинної стінки, що бере участь в адгезії. Рівень антитіл до гемаглютиніну у імунізованих дітей корелює із захистом від коклюшу.

Агглютіногени - поверхневі білки, що викликають вироблення антитіл, які опосередковано через адгезію до слизистих оболонок респіраторного тракту вступають в реакцію аглютинації з бактеріальними клітинами. Присутність цих антитіл у високих титрах корелює з клінічною захистом. Всього у бордетел виділено 16 агглютиногенов, з них 7-й - общеродовой, а основним видовим для В.рertussis є 1-й. Залежно від присутності основних агглютиногенов виділяють чотири головних серотипу: 1.2.0; 1.0.3; 1.2.3; 1.0.0. У В.retussis виділяють також 4, 5. 6, 13, 15, 16 агглютіногени.

Видовий агглютиноген для B.parapertussis - 14-й. Поняття про агглютіногеном тісно пов'язане з фімбріями (Fim). Виділяють Fim 2, Fim 3, Fim X.

Серотіпірованіе В.реrtussis засноване на реакції аглютинації бактеріальних клітин з моноклінального антитілами до фімбріального антигенів.

Аденилатциклаза - екзоферменти (токсин), який при потраплянні в клітини господаря каталізує утворення цАМФ. Токсин - основний отруйний фактор, що діє на початковому етапі інфекції.

Білками зовнішньої мембрани (БНМ) яатяются: пертактин (69кДа), білки Вrk A, 92кДа, ЗОкДа, 32кДа, Vag8 (95кДа).

Пертактин (69кДа) - відноситься до генетично контрольованої системи адгезінов, що продукуються бактерією при попаданні в людський організм.

Виділено інший білок, подібний за амінокислотним складом з пертактин на 29% і також бере участь в адгезії. Цей білок названий Brk A (Воrdetella resistance to killing)). Імовірно, він відповідає за стійкість до класичного комплемент-пов'язаному шляху елімінації.

Виділено також пов'язані з вірулентністю білки 92кДа, 30 кДа, 32 кДа. N-термінальні послідовності 30 кДа і 32 кДа гомологични С-термінальної послідовності Р93 -предшественніка пертактину.

Білки 84кДа і 75кДа, що зв'язуються з вакцинацією (антитіла до них виявлені у прівітих- хворих і здорових), в низькому відсотку випадків-у невакцинованих хворих. Чи не виявлені вони у невакцинованих і неболевших.

Таким чином, перераховані білки зовнішньої мембрани бордетел є факторами патогенності і одночасно протектівнимі антигенами, що забезпечують продукцію специфічних антитіл. Це важливо враховувати при створенні адекватних протівококлюшние вакцин.

Липополисахарид бордетел. До його складу входять два липида: А і X.

З Х-фракцією пов'язана біологічна активність липополисахарида. Ліпід А має низьку Пірогенні, нетоксичний, але зберігає антивірусну активність, ад'ювантні властивості, забезпечуючи неспецифічний захист від деяких бактерій. В цілому липополисахарид володіє імуногенність, проте з ним пов'язують реактогенність клітинної вакцини.

Трахеальний цітотпоксін - фрагмент пептидоглікану клітинної стінки. Відноситься до сімейства мурамілпептидів з різноманітними біологічними властивостями: пірогенність, ад'ювантна, артрітогенность, індукція медленноволнового сну і стимуляція продукції IL-1 (у відповідь на IL-1 синтезується оксид азоту - цитотоксичний фактор). Токсин вражає трахеальні епітеліальні клітини і викликає ціліостаз. При цьому порушується мукоциліарний кліренс - перша лінія захисту, і створюються умови для персистування збудника.

Дермонекротізірующій токсин володіє вазоконстрикторной активністю [5].

Таким чином, перераховані вище компоненти бактеріальної клітини збудника коклюшу володіють антигенними і протектівнимі властивостями різного ступеня вираженості. Визначення рівнів специфічної імунної відповіді до певних антигенів або групі антигенів коклюшного мікроба має важливе значення в оцінці постинфекционного і поствакцинального імунітету і залежить від чутливості і специфічності використовуваних для цієї мети серологічних методів.

Всі перераховані вище фактори присутні у свежевиделенних штамів коклюшного мікроба. Однак при зберіганні на штучних поживних середовищах проявляється мінливість збудника. Встановлено, що коклюшний мікроб проходить чотири фази в процесі сапрофітізаціі: свежевиделенних мікроб (гладкий штам), що володіє високими вірулентними і імуногенні властивості, відноситься до першої фази. У міру переходу до четвертої фази поступово втрачається імуногенність і вірулентність, змінюються культурально-біологічні властивості.

В цілому, бордетелли (В.реrtussis, В.раrapertussis) мають багато спільних компонентів в антигенному складі. При порівняльному іммуноелектрофорезе з 28 видами бактерій з 44 виділених антигенів В.реrtussis лише два антигену давали перехресну реакцію з представниками інших родів, головним чином, з грамнегативними бактеріями, у той час як з В.раrapertussis перехресно реагували 40 антигенів В.реrtussis. Лише один антиген (N21) можна вважати видоспецифічні [6].

1.2 Патогенез

У патогенезі виділяють три стадії:

I стадія адгезія. У ній беруть участь КТ, ФГА, фимбрии, перлактін і фактор колонізації трахеї. Передбачається, що ці адгезини послідовно або одночасно діють в процесі всього розвитку захворювання.

II стадія локальне пошкодження. Після адгезії і розмноження в місці вхідних воріт B. рertussis починає продукувати різні токсини. До основних факторів патогенності, чинним на цій стадії, відносяться трахеальний цитотоксин, що викликає ціліостаз і порушує відтік слизу і аденілатціклазную гемолізин, який порушує функцію епітеліальних і фагоцитуючих клітин дихальних шляхів. КТ безпосередньо шкідливу дію на тканини, але до кінця його роль залишається невивченою.

III стадія стадія системних проявів. У цій стадії збудник рідко виявляється в клінічному матеріалі, а провідна роль в патогенезі відводиться КТ [5].

1.3 Клінічна картина

Класифікація коклюшу

За типом:

1.Тіпічние.

2.Атіпічние:

-абортівная;

-стертая;

-бессімптомная;

-транзіторное бактеріоносійство кашлюку палички.

По тяжкості:

1. Легка форма.

2. Среднетяжелая форма,

3. Важка форма.

Характеристика клінічних форм коклюшу.

Типова форма протікає без явищ інтоксикації і підвищення температури тіла, характеризується нападоподібний судомних кашлем, що посилюється вночі і вранці, супроводжується почервонінням особи, гучними вдихами (репризами), що закінчується відходженням в'язкого слизу або блювотою.

Захворювання протікає циклічно зі зміною ряду періодів.

1.Інкубаціонний період триває від 3 до 14 днів (в середньому 7-8 днів).

2.Предсудорожний період коливається від 3 до 14 днів. Характерні наступні клініко-лабораторні ознаки: поступовий початок; задовільний стан хворого; нормальна температура тіла; сухий, нав'язливий, поступово посилюється кашель; відсутність інших катаральних явищ; відсутність патологічних (аускультативних і перкуторних) змін в легенях; триваюче посилення кашлю незважаючи на проведену симптоматичну терапію; типові гематологічні зміни - лейкоцитоз з лімфоцитозом (або ізольований лімфоцитоз) при нормальній ШОЕ; виділення кашлюку палички з слизу з задньої стінки глотки.

3.Період судомного кашлю триває від 2-3 до 6-8 тижнів і більше. Основним симптомом цього періоду є нападоподібний судомний (спазматичний) кашель. При неускладненому перебігу захворювання температура тіла хворого залишається нормальною. Напад кашлю представляє наступні один за одним дихальні поштовхи на видиху, що перериваються свистячим судорожним вдихом - реприза, що виникають при проходженні повітря через звужену (внаслідок ларингоспазму) голосову щілину. Закінчується напад наявність густого, в'язкого, скловидного харкотиння або блювотою. Приступу може передувати аура (почуття страху, занепокоєння, чхання, першіння в горлі і ін.). Напади кашлю можуть бути короткочасними або тривати 2-4 хв. Можливі пароксизми - концентрація нападів кашлю на короткому відрізку часу.

При типовому нападі кашлю характерний вигляд хворого: обличчя червоніє, потім синіє, стає напруженим, набухають шкірні вени шиї, обличчя, голови; відзначається сльозотеча. Мова висовується з ротової порожнини до межі, кінчик його піднімається догори. В результаті тертя вуздечки язика про зуби і її механічного перерастяжения відбувається надрив або освіту виразки.

Поза нападом кашлю зберігається одутлість і набряклість обличчя хворого, набряклість вік, блідість шкіри, періоральний ціаноз; можливі субкон'юнктівальнис крововиливи, петехіальний висип на обличчі і шиї.

Характерно поступовий розвиток симптомів з максимальним прискоренням і навантаженням нападів судомного кашлю на 2-му тижні судомного періоду.

У судорожному періоді є виражені зміни в легенях: при перкусії відзначається тимпанічний відтінок, вкорочення в межлопаточном просторі і нижніх відділах. Аускультативно над всією поверхнею ліг-ких вислуховуються сухі і вологі (середньо- і крупнопузирчатие) хрипи Характерним при кашлюку є мінливість симптомів: зникнення хрипів після кашлю та появу знову через короткий проміжок часу. Рентгенологічно спостерігається горизонтальне стояння ребер, підвищена прозорість легеневих полів, низьке розташування і сплощення купола діафрагми, розширення легеневих полів, посилення легеневого малюнка. Можливий розвиток ателектазів, які частіше локалізуються в області 4-5 сегментів легких.

4.Період зворотного розвитку (ранній реконвалесцепціі) триває від 2 до 8 тижнів. Кашель втрачає типовий характер, виникає рідше і стає легше. Поліпшується самопочуття і стан дитини, зникає блювота, нормалізуються сон і апетит хворого.

5.Період реконвалесценції (пізньої) триває від 2 до 6 місяців. В цей час зберігається підвищена збудливість дитини, можливі слідові реакції (повернення приступообразного судомного кашлю при нашаруванні інтеркурентних захворювань).

Атипові форми кашлюку. Абортивна форма - період судомного кашлю починається типово, але дуже швидко закінчується (протягом -Тиждень).

Стерта - у дитини протягом усього захворювання зберігається сухий нав'язливий кашель, нападоподібний судомний кашель відсутній.

Безсимптомна - клінічні прояви захворювання відсутні, але є висів збудника і / або наростання титрів специфічних антитіл в крові.

Транзиторное бактеріоносітельспію - висів кашлюку палички при відсутності клінічних проявів захворювання і без наростання титрів специфічних антитіл в динаміці дослідження. Бактеріоносійство у дітей спостерігається рідко (в 0,5-1,5% випадків).

Атипові форми кашлюку частіше відзначаються у дорослих і щеплених дітей.

За ступенем тяжкості виділяють легкі, середньотяжкі і важкі форми коклюшу.

При легкій формі число нападів судомного кашлю за добу становить 8-10; вони нетривалі. Блювоти не буває, ознаки кисневої недостатності відсутні. Стан хворих задовільний, самопочуття не порушено, апетит і сон збережені. Зміни в аналізі крові відсутні або кількість лейкоцитів не перевищує 10-15,0x10 9 / л, вміст лімфоцитів - до 70%. Ускладнень, як правило, не буває.

Среднетяжелая форма характеризується наявністю нападів судомного кашлю до 15-20 разів на добу, вони тривалі і виражені. В кінці нападу спостерігається відходження в'язкого густого слизу, мокротиння і, нерідко, блювота. Загальний стан хворих порушується: діти примхливі, мляві, плаксиві, дратівливі, неохоче вступають в контакт. Апетит знижується, ущільнюється вагова крива; сон неспокійний, переривчастий. Під час нападу кашлю з'являється періоральний ціаноз. Навіть поза нападу кашлю відзначається одутлість особи, набряклість вік. Зміни в гемограмі виражені - лейкоцитоз до 20-25,0Х10 9 / л, лімфоцитоз до 80%. Нерідко виникають ускладнення.

При важкій формі число нападів судомного кашлю за добу досягає 25-30 і більше. Напади важкі, тривалі, як правило, закінчуються блювотою; спостерігаються пароксизми. Відзначаються різко виражені ознаки кисневої недостатності - постійний періоральний ціаноз, акроціаноз, ціаноз особи, блідість шкіри. Спостерігається одутлість особи, набряклість повік, нерідко виникають геморагії на шкірі шиї, плечового пояса, можливі крововиливи в склери очей. Різко порушується сон і апетит, знижується вагова крива. Хворі стають млявими, дратівливими, адінамічние, погано вступають в контакт. Зміни в гемограмі різко виражені: лейкоцитоз досягає 30-40,0х10 9 / л і більше, лімфоцитоз - до 85% і більше. Характерно виникнення загрозливих для життя ускладнень (зупинка дихання, порушення мозкового кровообігу) [6].

1.4 Лабораторна діагностика

1.4.1 Загальний аналіз крові

У картині крові характерно: гіперлейкоцитоз (до 30-40х10 9 / л і більше) і лімфоцитоз (до 70 -80%), який з'являється в катаральний період. У міру розвитку хвороби ці зміни досягають максимуму (в перші тижні спазматического періоду), а потім поступово знижуються, паралельно стихання інфекційного процесу [7]. Виразність лейкоцитозу залежить від ступеня тяжкості. ШОЕ зазвичай уповільнена або в межах норми [8].

Слід мати на увазі, що при наявності ускладнень гемограмма може змінюватися: наростання нейтрофилеза з ядерним зсувом і прискорення ШОЕ [7].

1.4.2 Мікробіологічні методи лабораторної діагностики

Коклюшний мікроб (або інші бордетелли) розмножується в респіраторному тракті хворого. Дані бактеріологічного обстеження хворих в процесі хвороби показують, що мікроби розмножуються найбільш інтенсивно протягом катаральної стадії і на 1 - 2-й тижні пароксизмальної стадії. Мікроби виділяються рідко (7%) після 4-го тижня хвороби. При субклінічній формі хвороби мікроби виділяються тільки протягом 2 тижнів від початку кашлю. При лікуванні антибіотиками кількість бордетел в респіраторному тракті значно менше, і виділити їх, безумовно, важче.

Для бактеріологічного дослідження використовують виділення (слиз) з задньої стінки носоглоточного простору [9].

Отримання матеріалу для дослідження.

Матеріал для мікробіологічного дослідження може бути отриманий найбільш зручно, особливо для дітей грудного віку, носоглотковим тампоном. Матеріал, взятий тампоном через рот (постназальном тампоном), зазвичай більш забруднений сторонньої флорою, яка ускладнює або пригнічує ріст бордетел. Посів на середу безпосередньо накашліваніем на чашку з середовищем (метод "кашлевих пластинок") не так ефективний, як метод "тампонів" і витісняється повсюдно в практиці останнім. Деякі автори отримують мокроту (слиз) відсмоктування в колектор. Ідеальний час для забору матеріалу, мабуть, ранок, перед їжею.

· Метод "тампонів"

Носоглотковий тампон являє собою маленький шматочок вати, накрученою щільно на кінець тонкої еластичної мідної або ніхромового дроту (діаметр приблизно 0,51 мм). Стерилізувати пробірку з тампоном слід автоклавуванням.

Помічник руками фіксує голову дитини. Кінчик тампона, змочений в стерильній рідини (фізрозчин або транспортному середовищі), вводять через ніздрю дитини в носоглотку на п'ять см або більше, в залежності від віку дитини, до зіткнення із задньою стінкою носоглотки і залишають його там на кілька секунд. Часто при цьому починається кашель, тампон не видаляють до закінчення кашлю, це збільшує шанси отримання позитивних результатів. Не можна застосовувати зусилля при утрудненому просуванні тампона внаслідок викривлення носової перегородки або аденоїдів, слід спробувати ввести тампон через іншу ніздрю, хоча іноді і це буває неможливо.

Ротової тампон являє собою маленький шматочок вати на зігнутою дроті (зігнута частина повинна бути короткою, близько 1 см в довжину). Тампон вводять через рот (слід уникати його забруднення в ротовій порожнині), проводять його за м'яке піднебіння до задньої стінки глотки і обережно обертають.

Потім тампон виймають з ніздрі (або ротової порожнини) і відразу ж роблять їм посів.

Якщо посів зробити на місці неможливо з технічних причин і тампон необхідно відправити в лабораторію, то для збереження тампона в задовільному стані до його посіву спеціально використовують транспортну середу. Звичайна транспортне середовище, така як середовище Стюарта, непридатна для кашлюкових мікробів. Тампон можна використовувати для посіву протягом 4 годин при збереженні його в 1% розчині казеїнового гідролізату, в повній діагностичної середовищі або в такий же середовищі без агару. Зазвичай тампон зберігається в пробірці з ватним корком, але для транспортної середовища використовують коркову пробку і дріт пропускається через пробку так, щоб вата не торкнулася агару або рідини. Після взяття проби тампон поміщають в пробірку і опускають дріт до зіткнення вати з транспортним середовищем.

В лабораторії тампон виймають з пробірки і використовують для посіву на чашці з середовищем.

При використанні цього методу частота виділення кашлюкових мікробів істотно не знижується, якщо транспортне середовище доставлена ​​в лабораторію в день взяття проби, але якщо середу залишають при кімнатній температурі до наступного дня, то відсоток виділення може бути дуже низьким (відбувається заростання сторонньої мікрофлорою навіть при додаванні в середу пеніциліну).

Слід зазначити, що тампоном можна відразу ж зробити посів на косяк з КУА, модифікованим додаванням пеніциліну, розлитим в маленькі флакони з кришками і відправити поштою до лабораторії для дослідження на наявність кашлюкових мікробів. Позитивні результати дають культури, що транспортуються не більше 2 - 3 днів.

· Метод "кашлевих пластинок"

У момент появи кашлю розкриту чашку з живильним середовищем підносять до рота на відстані 15 - 20 см. І тримають кілька секунд (протягом 4 - 6 кашельних поштовхів). У разі відсутності спонтанного кашлю можна натиснути на мову шпателем або злегка помасажувати гортань.

Після взяття матеріалу чашку негайно закривають, щоб уникнути забруднення (рекомендується повторити процедуру з тієї ж чашкою), і відправляють в лабораторію для інкубації. До відправки в лабораторію чашки можна зберігати деякий час при кімнатній температурі, але це небажано, так як затягується отримання відповіді.

· Збір носоглоткових виділень відсмоктування

Стерильну поліетиленову живильну трубку приєднують до одного з отворів пластмасового колектора для слизу. Інший отвір з'єднують з пиловідводним насосом (або шприцом). Трубку вставляють в ніздрю хворого і просувають в носоглотку. Виділення збирають в колектор при негативному тиску не більше 2 кг / см 2.

Трубку виймають і повторюють процедуру через іншу ніздрю. При необхідності слиз, що вистилає трубку, відсмоктують невеликою кількістю (не більше 0,5 мл) 0,85% хлориду натрію.

Цей метод застосовують в особливих випадках, наприклад, при обстеженні новонароджених. Слиз використовують відразу ж для посіву або для иммунофлюоресцентного методу таким же шляхом, як і тампон [10].

Середовища для культивування Для первинного виділення і культивування кашлюкових мікробів протягом багатьох років успішно застосовувалася тільки оригінальна середу Борде - Жангу або її модифікації. Для діагностичної роботи рекомендується модифікований рецепт середовища, в якому вміст крові зменшено з 50% до 15 - 20%. При такому змісті крові і співвідношенні солей можливе виявлення гемолітичної зони навколо колоній, що служить гарним діагностичним критерієм. Потім з'явилася інша, проста по складу п'ятниця - напівсинтетичний вугільний агар, за допомогою якої багато лабораторій отримують результати не гірше, ніж із середовищем Борде - Жангу. У вугільний агар, також як в середу Борде - Жангу, додають Дефібриновану кров. У всіх практичних лабораторіях успішно використовують казеїново-вугільний агар (КУА). Це живильне середовище забезпечує результати, адекватні результатам із середовищем Борде - Жангу, але вигідно відрізняється від неї доступністю і простотою виготовлення.

Живильне середовище, використовувана для посіву тампоном, повинна затримувати зростання сторонньої мікрофлори. Для придушення зростання грамположительной мікрофлори зазвичай в поживні середовища додають пеніцилін. Для збільшення шансів на отримання позитивного результату для посіву використовують 2 чашки (одна без пеніциліну). Але частина штамів збудника коклюшу чутлива до пеніциліну, в зв'язку з чим використання цього антибіотика знижує відсоток позитивних проб. Для запобігання негативного впливу пеніциліну на бордетел в деяких лабораторіях використовують зменшену дозу антибіотика. У зарубіжній практиці для цих цілей використовують цефалексин, а іноді і амфотерицин В- для придушення грибкової флори. На відміну від пеніциліну, цефалексин не пригнічує ріст B. pertussis і B.parapertussis і більш активний щодо супутньої мікрофлори.

Слід зазначити, що кожну серію середовища необхідно попередньо перевірити з відомою культурою кашлюкових мікробів на освіту колоній і характерну гемолитическую зону.

Посів. Для отримання ізольованих колоній забір матеріалу роблять ретельно втираючи його тампоном спочатку на периферії середовища у вигляді 4-5 бляшок, а потім Z-подібним штрихом в центрі чашки.

Інкубація і контроль культур Засіяні чашки або пробірки інкубують в термостаті при температурі 35--36 ° С в умовах підвищеної вологості протягом 5 днів або до виявлення характерних колоній. Ділянки середовища, пророслі сторонньої мікрофлорою, вирізають стерильним скальпелем або голкою, щоб запобігти їх розростання. Чашки щодня переглядають на наявність росту з лупою або в бінокулярний стереоскопічний мікроскоп. Для виявлення зони гемолізу чашки проглядаються в прохідному, а колонії в відбитому світлі.

Критерії для ідентифікації видів бордетел. В. pertussis - повільно зростаючий мікроб, тому колонії з'являються частіше за все не раніше, ніж через 3 дні інкубації, а іноді тільки на 7-ий день. Колонії паракоклюшная мікроба можна виявити вже через 24 години росту. Для проведення діагностичної ідентифікації бордетел цілком достатньо виявити характерні колонії на поверхні твердої живильного середовища, перевірити середу на наявність зони гемолізу і коричневого пігменту (освіта тирозинази), виявити характерні по виду мікроби в мазках, пофарбованих за Грамом, і поставити агглютинацию на скло з видоспецифічні сироватками .

Порядок ідентифікації. Відбір колоній. Для ідентифікації відбираються колонії з гладкими краями, опуклі, блискучі, сірувато-білого кольору на середовищі Борде - Жангу або сірувато-кремового на КУА. На середовищі з кров'ю колонії оточені зоною гемолізу.

Частина відібраної колонії або колонію використовують для аглютинації на склі з полівалентними або моноспецифічними сироватками до Агг 1,14 і 12 (контроль з фізіологічним розчином). Для цього підозрілу колонію суспендують в краплі фізіологічного розчину на предметному склі, поруч з нею завдають краплю кашлюку або паракоклюшная (в разі покорічневенія середовища) сироватки відповідного розведення (для полівалентної сироватки зазвичай 1/100), потім в неї переносять випробувану суспензію і змішують легким обертанням скла .

Краплі з агглютинацией на склі висушують і фарбують по Граму для мікроскопії. У препаратах повинні бути грамнегативні, слабоокрашенниє, овоидной форми палички (коккобацілламі), в сироватці розташовані маленькими купками, а в фізіологічному розчині окремо або парами, іноді у вигляді коротких ланцюжків. Частину колонії (або іншу колонію) використовують для пересіву на чашки або пробірки.

Для виявлення колоній в ранній стадії зростання успішно застосовується люмінесцентно-серологічний метод. Дуже хорошим доповненням до цього методу є перевірка мазків - відбитків з мікроколоній. Якщо в мазках виявляються яскраво світяться бактерії (з кашлюковим і паракоклюшная люминесцирующими імуноглобулінами), то негайно реєструється позитивний результат. Це часто дозволяє прискорити відповідь на кілька днів.

Якщо зростання на чашках не дозволяє провести всі зазначені тести, або отримані результати недостатньо переконливі для укладення з якої-небудь причини, то слід зробити пересівання і повторити тест (бажано використовувати агглютинацию на склі).

Для ідентифікації збудників коклюшу та паракашлюку використовують ознаки представлені в таблиці 1.

Таблиця 1 Порівняльна характеристика збудників коклюшу та паракашлюку.

ознака

B.pertussis

B.parapertussis

Час появи колоній, (ч.)

48-72

24-48

Розмір колоній (в мм.)

1-2

2-4

рухливість

-

-

Зростання на простому агарі

-

+

Освіта коричневого пігменту на простому агарі

-

+

редукція нітратів

-

-

Утилізація цитрату

-

+

Освіта уреази

-

+

оксидаза

-

-

Аглютинація монорецепторними сироватками до агглютиногенам

+

-

фактор 1

+

-

фактор 12

-

+

фактор 14

-

-

Оцінка і повідомлення результатів

· Позитивний результат

Якщо на чашках виявлені колонії мікробів, які по культуральним, морфологічним і серологічним ознаками відповідають В. pertussis (В. раrapertussis) в реакції аглютинації на склі, дають позитивну відповідь.

· Негативний результат

Якщо на 4 - 5 день на чашках, не знайдено колоній, відповідних роду бордетелли, дають негативну відповідь. У таких випадках рекомендується аналіз повторити.

При мізерному зростанні на чашках або якщо вони суцільно заросли сторонньої мікрофлорою, дають відповідь "кашлюковим мікроби (паракоклюшная) не виділені". При цьому вказують причину і пропонують повторити дослідження.

Диференціація видів. Диференціація повинна грунтуватися на результатах не тільки серологічних (виявлення серовариантов), але і біохімічних тестів. Остаточну диференціацію кашлюкових і паракоклюшная мікробів проводять шляхом пересіву на агар з тирозином і постановкою проби на уреазу. Пігмент (покорічневенія середовища) особливо добре видно на КУА або пептонном агарі, в останній додають 0,1% тирозину, а також на шматочку картоплі в пробірці з 5% -розчину гліцерину в фізіологічному розчині.

Для збереження і підтримання культур в процесі роботи необхідно їх пересівати на середовищах Борде - Жангу або КУА кожні 7 - 10 днів. Для тривалого збереження культури висушують із замороженого стану і зберігають при температурі 3-8 ° С.

Оскільки виділення кашлюкових мікробів (методом культур) від хворих з підозрою на кашлюк пов'язано з рядом труднощів (процедура вимагає багато часу, спеціальної середовища і т.д.), рекомендується використовувати в лабораторній діагностиці такі методи: 1) імунофлюоресцентним метод для виявлення кашлюкових і паракоклюшная мікробів в пробах секрету, отриманого від хворих; 2) виявлення кашлюкових і паракоклюшная антитіл в сироватках хворих за допомогою реакції аглютинації, зв'язування комплементу [3].

коклюшний інфекція бактеріологічний діагностика

1.4.3 Імунофлюоресцентний метод

Люмінесцирующие коклюшні і паракоклюшная антитіла можна використовувати для прискореної діагностики шляхом прямого фарбування мазків з носоглоткового слизу і для ранньої ідентифікації молодих колоній на чашках [5].

За свою специфічність і швидкості люмінесцентно-серологічний метод, вперше розроблений в 1960 - 1961 роках, є одним з найбільш прийнятних методів діагностики кашлюку та може повністю замінити метод виділення культур. Прямий метод імунофлюоресценції успішно застосовується для виявлення кашлюкових і паракоклюшная мікробів в носоглоткових мазках від хворих з підозрою на кашлюк, від дітей, які контактували з ними, і від здорових дітей і дає результати, що збігаються з результатами методу виділення культур.

Люмінесцирующие імуноглобуліни отримують з гіперімунних ослиних сироваток, кон'югацію з флюоресцеінізоціанатом. Люмінесцирующие імуноглобуліни розчиняють в дистильованої воді.

Відповідність робочого розведення розчинів люминесцирующих імуноглобулінів необхідно періодично перевіряти з відомими культурами (мазки з суспензій на фосфатному буферному розчині густотою 10 Міжнародних одиниць каламутності / мл.). При цьому іноді світіння з чистими культурами може бути менш яскравим. При зниженні активності препарату розведення зменшують.

Прискорена діагностика кашлюку і паракоклюшная інфекції прямим імунофлюоресцентним методом.

Матеріал для дослідження (виділення слизової носоглотки) від хворих або осіб, які контактували з хворими, забирають носоглотковим тампоном і негайно роблять на предметному склі два мазка розміром приблизно 1,5 см. в діаметрі. Висушені при кімнатній температурі препарати фіксують на вогні (через полум'я пальника) ацетоном або 96 ° етиловим спиртом 10 --15 хвилин. Фіксовані препарати можна зберігати в закритій чашці Петрі протягом 2 місяців в рефрижераторі. Перед фарбуванням мазки повинні бути зігріті при кімнатній температурі.

Забарвлення препаратів. На готові препарати наносять люмінесцирующие імуноглобуліни (на один мазок - вакцини, на інший - паракоклюшная) і поміщають у вологу камеру на 20 хвилин при температурі 35 - 37 °. При закінченні забарвлення препарат спочатку промивають фізіологічним розчином (рН 7,2 - 7,6) або фосфатним буфером протягом 5 - 7 хвилин, а потім обполіскують дистильованою водою. Після промивання препарат висушують і потім послідовно переглядають в люмінесцентний мікроскоп.

При перегляді препаратів слід використовувати нефлюоресцірующее іммерсійне масло. У кашлюкових і паракоклюшная бактерій при фарбуванні відповідними люминесцирующими імуноглобулінами повинен бути видимий яскраво-зелений (смарагдовий) ободок навколо темного центру клітини (крайове свічення).

Люмінесцирующие коклюшні і паракоклюшная імуноглобуліни іноді яскраво забарвлюють поодинокі особини стафілококів, дифтероїдів і дріжджових клітин. Морфологія таких клітин і характер свічення (жовто-зелений) дає можливість правильно їх ідентифікувати. У сумнівних випадках потрібно повторний аналіз і виділення чистої культури.

Позитивна відповідь по імунофлюоресцентному методу або перегляді мазків з носоглоткових виділень щодо збудника коклюшу і паракашлюку видають на підставі виявлення не менше 2 - 3 характерно світяться, типових по морфології клітин гомологичной культури при перегляді не менше 50 полів зору в різних ділянках кожного мазка [3 ].

1.4.4 Полімеразна ланцюгова реакція

Сучасним і перспективним є молекулярно-біологіческнй метод - полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР).

Забір матеріалу здійснюється назофарингеального тампонами або шляхом аспірації носоглоткового слизу. Отримано дані про те, що використання тампонів з кальцію альгінату і транспортування матеріалу в транспортному середовищі різко знижують ефективність методу, що пов'язано з наявністю факторів, що пригнічують полімеразної ланцюгової реакції. У зв'язку з цими обставинами рекомендовано використовувати тампони типу Dacron і «суху» транспортування, а ще більш переважно отримувати матеріал з носоглотки шляхом аспірації.

Після попередньої екстракції ДНК проводять ізольоване множення (ампліфікації) фрагмента гена мікроорганізму з подальшим виявленням амплифицированного ділянки.

Чутливість методу складає кілька бактерій в пробі, а специфічність наближається до 100%. Отримання результату можливо протягом одного дня. У випадках виділення культур бордетел від пацієнтів ПЛР дає позитивний результат в 73-100%, а при негативних результатах бактеріологічного дослідження ефективність ПЛР становить 71%.

В даний час розроблені тест-системи для ідентифікації різних ділянок геному В.реrtussis: гена коклюшного токсину, порінов, аденілатціклазного гемолизина, повторюваного ділянки ДНК. Всі ділянки, крім останнього, зустрічаються в геномі збудника паракашлюку. Вибір в якості об'єкта пошуку повторюваного ділянки ДНК переважно також через більшої чутливості при меншій кількості циклів ампліфікації. Це знижує ймовірність ложположітельних результатів. Для підвищення чутливості і специфічності методу використовують тест-системи, в яких після 20-25 циклів з зовнішніми праймерами проходить 25-30 циклів з внутрішніми праймерами. Запропоновано систему для паралельної діагностики з поділом В.реrtussis і В.раrapertussis. Для цього використовуються праймери до повторюваних послідовностей в геномі В.реrtussis (80 копій) і В.раrapertussis (20 копій). Для виключення впливу великого числа копій ділянки ДНК В.pertussis на чутливість реакції з ДНК В.раrapertussis запропоновано використовувати праймери в співвідношенні, назад пропорційному кількості копій в ДНК, тобто 4: 1.

Для візуалізації результату використовують фарбування в агарозному гелі і блот-гібридизацію.

Виняток помилок:

-для виключення хибнопозитивних результатів необхідно проводити всі етапи постановки реакції (виділення ДНК, власне амплификацию і детекцию результатів) в різних приміщеннях. Додатково застосовують систему «Сагг-оveг» з урацил-N-глікозілазой, яка руйнує продукти попередніх ампліфікації.

-для контролю ложоотріцательних результатів (при заборі аспирата) паралельно проводиться реакція для визначення людської ДНК, так як в зразку завжди будуть людські клітини, і результат враховується як позитивний тільки при позитивній реакції на людську ДНК, що говорить про збереження зразка. Інший метод є ко-ампліфікація так званого гетерогенного внутрішнього стандарту - штучно створеної і додається в реакцію послідовності ДНК, ампліфікація якої відбувається тільки при наявності двох праймерів: одного для B.pertussis, інший для B.parapertussis (контроль роботи праймерів) [6] .

1.4.5 Блот -ELISA (ІФА)

Блот-ELISA- це дослідження дозволяє візуально визначати колонії В. рertussis за допомогою моноклональних антитіл до филаментозному гемаглютиніну і ліпополісахаридом збудника. Чашки з первинним посівом інкубують при звичайних умовах 40 годин, після чого на них поміщають нітроцелюлозні диски, далі йде інкубація чашок з дисками 10 хв при 22 ° С. Потім диски знімають з чашок і обробляють лізуючого розчином з наступною інкубацією з моноклональними антитілами і субстратом. В результаті вдається виявити одиничні колонії В.рertussis. Перехресних реакцій з представниками інших родів бактерій не відзначено. За допомогою антитіл до гемаглютиніну виявлялися також збудники паракашлюку, а антитіла до ліпополісахаридом утворювали поодинокі перехресні реакції з іншими бордетелли. Широкого поширення цей метод не отримав [5].

1.4.6 Серологічні методи діагностики

Серологічна діагностика кашлюку полягає в виявленні в досліджуваній сироватці специфічних антитіл. . Дослідження проводять на 2 - 3-му тижні захворювання, коли в крові хворих з'являються специфічні антитіла. Результати серологічних реакцій мають діагностичне значення при вивченні їх в динаміці, досліджуючи парні сироватки хворого з інтервалом 1 - 2 тижні. Серологічні реакції слід ставити паралельно з кашлюковим і паракоклюшная діагностикумами. . Кров для дослідження беруть з пальця (0,8 - 1,0 мл) з дотриманням всіх правил асептики [3]. .

Класичним серологічним методом діагностики коклюшу, застосовуваним вже більше 50 років, є реакція аглютинації (РА). В даному методі виявляють антитіла, індуковані агглютиногенами збудників, що знаходяться в 1 фазі.

РА ставлять з культурою, вирощеної на казеіново- вугільному агарі або середовищі Борде-Жангу протягом 2 діб. Сироватку розводять до титру. Сироватку відповідного розведення і мікробну суспензію беруть в рівних обсягах. Суміш добре струшують і ставлять на 2 години в термостат при 35-37 С.

Результат враховують через 24 години .. Інтенсивність реакції відзначають плюсами (++++, +++, ++, +). За титр сироватки беруть останнє розведення, в якому аглютинація є на ++, помножене на 2 [7].

Найбільш зручний метод прискореної аглютинації, особливо для визначення аглютинінів в сироватці щеплених дітей.

Для цього використовуються спеціальні скла з лунками або полістероловой пластинки. Антиген і сироватки розливають по краплях, а мікробну суспензію готують приблизно густотою 20 30 млрд / мл. Одночасно ставлять контроль культури з фізіологічним розчином (підтверджує відсутність спонтанної аглютинації). При постановці реакції на склі ямочки покривають покривним склом. На полістероловой платівці лунки набагато глибше і їх можна не покривати.

Для того, щоб реакція відбулася швидше, пластинку або скло качають на спеціальній гойдалці. Тривалість гойдання в залежності від умов повинна бути від 4-5 до 15 хвилин. При відсутності приладу хитання проводять руками. Після гойдання пластинку переносять на 1 годину в термостат.

Результати, отримані при постановці реакції прискореним способом повністю збігаються з пробіркових методом.

Облік результатів. При використанні РА для оцінки протівококлюшного імунітету слід вважати розведення 1: 160 (умовно-захисним титром), а розведення 1: 320 (захисним титром). . Діагностичним титром реакції аглютинації у нещеплених і не хворіли на дітей вважається розведення 1:80. . При кашлюку агглютинирующие антитіла можуть бути відсутні в сироватках хворих, з бактеріологічно підтвердженим діагнозом, якщо парні сироватки порівнюються з інтервалом більше місяця. Частоту хибнопозитивних результатів можна знизити шляхом абсорбції сироваток перед дослідженням. У імунізованих дітей і дорослих позитивні результати реакції враховують при дослідженні парних сироваток крові, взятих з інтервалом 1 - 2 тижні при наростанні титру не менше ніж в 4 рази. Недоліками реакції є низька чутливість і нестандартність, так як титри агглютиногенов залежать від бактеріального штаму, який використовується в якості антигену [10].

З метою підвищення чутливості реакції аглютинації були розроблені еритроцитарні діагностикуми для реакції непрямої гемаглютинації (РНГА). Для проведення РНГА, оброблені еритроцити тварин сенсибілізованими комплексом антигенів коклюшного мікроба. Ця реакція більш чутлива, ніж реакція аглютинації. Однак в процесі створення діагностикумів використовувалися різні методи сенсибілізації і стабілізації еритроцитів, а отримання адсорбируемого антигену (цілі клітини збудника або клітинні компоненти) проводилися різними способами, що призвело до різної інформативності одержуваних даних. У зв'язку з цим РНГА не знайшла широкого застосування в практиці [6].


  • Діагностика кашлюку і паракоклюшная інфекцій

  • Скачати 54.25 Kb.