Антіглобуліновой тест Кумбса - методика, показники норми






    Головна сторінка





Дата конвертації11.10.2017
Розмір3.51 Kb.
ТипСтаття

Принцип антіглобуліновой тесту Кумбса. Антіерітроцітние антитіла неповного типу і молекули комплементу (С), що знаходяться на поверхні еритроцитів виявіми - прямий тест - їх агглютинацией в контакті з тваринної сироваткою, що містить антитіла на людський антіглобулін (антиглобулінова сироватка). Вільні в сироватці неповні антитіла виявляються - непрямий тест - їх закріпленням на суміші нормальних еритроцитів групи 0, все антигени яких належать відомої резус-системі, далі агглютініруемие під впливом антіглобуліновой сироватки.

Матеріали, реагенти антіглобуліновой тесту Кумбса: пробірки на 10/100 мл; градуйовані піпетки на 1, 2 мл; пастерівські піпетки; штативи; предметні нешліфовані скла; 8,5 ‰ розчин NaCl; еритроцити. Еритроцити хворого, так само як і належать до групи 0 отримаємо з свежеотобранной крові на противосвертиваючих речовині (розчин ЕДТА).

Еритроцити групи 0 відібрати з таким розрахунком, щоб вони виходили від осіб в нормі і містили всі антигени резус-системи. Їх можна зберігати до 7 днів в аутологічної плазмі, при температурі + 4 ° С. У разі відсутності еритроцитів групи 0, відомої антигенної мозаїки, можна використовувати суміш еритроцитів групи 0, резус-позитивних і резус-негативних еритроцитів.

Сироватка хворого повинна бути свежеотобранной.

Антиглобулінова сироватка виробляється інститутом ім. д-ра І. Кантакузіно, випускається в лиофилизированном вигляді в містять 1 мл ампулах. Після розчинення сироватку зберігати при температурі -20 ° С.

проба Кумбса

Техніка антіглобуліновой тесту Кумбса:
а) Прямий тест Кумбса: еритроцити хворого промити 3 рази 8,5 ‰ розчином NaCl.
На кілька предметних стекол нанести по великій краплі з розведень антіглобуліновой сироватки, а поруч - по маленькій краплі з осаду еритроцитів хворого; перемішати краплі кутом скла. Приготований матеріал залишити на столі 5 хв., Потім досліджувати на наявність агглютінати. У разі позитивного результату визначити максимальний аглютинує титр.

б) Непрямий тест Кумбса: еритроцити групи 0, резусположітельние і резус-негативні промити 3 рази 8,5 ‰ розчином NaCl і піддати впливу сироватки хворого з розрахунку 2 краплі еритроцитів на 8-10 крапель сироватки, потім, протягом 60 хв., провести інкубацію при температурі 37 ° С. Після цього знову тричі промити еритроцити і впливати на них антіглобуліновой сироваткою, за вказівками для прямого тесту Кумбса.

Коли мова йде про холодових активних антитіла сенсибілізацію еритроцитів групи 0 провести 60 хв. при температурі + 4 ° С.

Примітка: 1) Не проводити прямий тест Кумбса на еритроцитах, збережених один або кілька днів при температурі + 4 ° С або кімнатній температурі, оскільки результати можуть виявитися хибнопозитивними за рахунок фіксації наявних в нормальній сироватці непол них, активних на холоді антитіл. 2) У випадках вираженої гіперпротеїнемії промивати еритроцити 4-5 разів і перевірити відсутність сироваткових білків в останній промивної рідини, за допомогою сулфосаліціловой кислоти.

Можливий залишок 2 мкг IgG / мл в еритроцитної осаді може нейтралізувати антіглобуліновой сироватку. Тест Кумбса можна проводити і за допомогою моноспеціфіческіх анти-IgG, -IgM, -IgA С3 і -С4 сироваток з метою уточнення виду, що знаходяться на поверхні еритроцитів глуболін, наприклад, у страждаючих аутоімунноїгемолітичної анемією.


  • Матеріали, реагенти антіглобуліновой тесту Кумбса
  • Сироватка
  • Техніка антіглобуліновой тесту Кумбса: а) Прямий тест Кумбса
  • Непрямий тест Кумбса